Технология биологически активных добавок к пище на основе ферментативного гидролиза гонад гидробионтов

• Автор: Позднякова, Юлия Михайловна
• Шифр специальности: 05.18.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 160 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение

1 Обзор литературы

1.1 Характеристика состава и свойств нуклеопротеидов, входящих в состав гонад гидробионтов

1.2 Биологическая активность компонентов нуклеопротеидов

1.3 Характеристика эндогенных ферментов в мужских гонадах гидробионтов

4 1.4 Способы получения белковых гидролизатов

1.5 Ферментные комплексы, используемые для получения гидролизатов

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2. Объекты, материалы и методы исследований

2.1 Объекты и материалы исследований
2.2 Методы исследований 3 Результаты и их обсуждение
3.1 Характеристика сырья по содержанию ДНК, активности эндогенных ферментов
3.1.1 Оценка сырья по содержанию ДИК
3.1.2 Исследование активности протеолитичсских ферментов в
гонадах гидробионтов
3.1.3 Исследование активности дезоксирибонуклеаз в гонадах гидробионтов
3.1.4 Кинетические параметры действия щелочных и кислых дезоксирибонуклеаз в гонадах гидробионтов
3.2 Подбор оптимальных параметров для ферментативного гидролиза нуклеопротеидных комплексов гонДд гидробионтов
3.2.1 Исследование параметров протеолиза исходного сырья
3.2.2 Исследование кинетики гидролиза нуклеиновых кислот
3.3 Характеристика химического состава гидролизатов из гонад гидробионтов
3.3.1 Белковопептидный и аминокислотный состав
3.3.2 Сравнительная характеристика состава олигонуклеотидов в препаратах из молок рыб
3.3.2.1 Сравнение состава нуклеопротеидных комплексов и гидролизатов из молок рыб
3.3.2.2 Сравнительный состав гидролизатов, полученных с применением различных ферментных препаратов
3.3.2.3 Сравнение состава олигонуклеотидов гидролизатов молок различных видов рыб
3.3.2.4 Фракционный состав низкомолекулярных нуклеиновых
кислот в препаратах из гонад различных видов гидробионтов
3.4 Технологическая схема получения БАД Нуклеатин
3.4.1 Условия ферментативного гидролиза
3.4.2 Разделение олигонуклеотидов методом ультрафильтрации
3.4.3 Обоснование возможности применения разработанного метода
для гонад различных видов гидробионтов
3.5 Исследование медикобиологической активности препаратов из гонад гидробионтов
Заключение
Выводы
Список литературы


Публикации: по теме диссертации опубликовано работ. Структура и объем работы. Диссертация включает введение, обзор литературы, экспериментальную часть, заключение, выводы, список литературы, содержащий 0 источников (в том числе зарубежный). Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность научному руководителю Т. Н. Пивненко, оффициальным оппонентам Л. В. Шульгиной, Э. Н. Киму, а также всем коллегам, оказавшим помощь в подготовке диссертационной работы. ДНК представляет собой полимер, мономерными единицами которого являются дезоксирибонуклеозидмонофосфаты. В большинстве случаев ДНК имеет высокую молекулярную массу в пределах 6 - у Да и даже выше. В природе ДНК находится в клеточном ядре в виде дсзоксирибонуклеопротеида. Для ее выделения необходимо сначала экстрагировать дезоксирибонуклеопротсид и затем отделить ДНК от связанного с ней белка. Выбор того или иного метода в каждом конкретном случае определяется природой использованного биологического материала. Как уже было сказано выше, наиболее перспективным источником получения нуклеиновых кислот являются молоки рыб (Пашук, ). Технология выделения высокомолекулярной ДНК многостадийна, трудоемка и требует дорогостоящего оборудования и реактивов. Исследования показали, что для получения биологически активного продукта пригодна и низкомолекулярная ДНК (молекулярная масса 2 х 5 - 5 х ? Да). Она значительно дешевле и доступнее из-за упрощенного технологического процесса выделения (Патент РФ № ), разрешена к применению в качестве биологически активной пищевой добавки для профилактики ряда заболеваний и для повышения умственной и физической работоспособности. Данный препарат получают из молок лососевых рыб. Способ получения включает две стадии - экстракцию водным раствором №С1 и осаждение в этиловом спирте. Содержание нуклеиновых кислот в препарате при этом достигает - %, молекулярная масса ДНК -0- 5 к Да. В препаратах ДНК из молок различных видов рыб, полученных указанным способом, проводилось исследование зависимости растворимости от pH и температуры (Касьяненко и др. Показано, что при pH 6,5 и 7,0 даже через и мин соответственно суспензия ДНК в воде из молок лосося и сельди остается устойчивой и только при pH 8,0 - 8,5 достигается полная прозрачность. В то же время ДНК минтая при заданном диапазоне pH (5,5 -9,0) не растворяется даже в течение часа. Те же тенденции распространяются и на зависимость растворимости препаратов от температуры. При нагревании растворов до °С при pH 8,0 препарат ДНК лосося полностью растворяется в течение 2 мин, сельди - в течение 4,5 мин. ДНК минтая даже при нагревании в течение мин остается нерастворимой. Другой способ получения натриевой соли ДНК («Деринат») (Патент РФ . Препарат содержит не менее % натриевой соли ДІІК с молекулярной массой 0 - 0 кДа. Дсрината» ДНК-№ - состоит из двух полинуклеотидных цепей, которые образуют двойную спираль. Направление цепочек взаимно противоположное. Сахарофосфатный остов располагается по периферии двойной спирали, а азотистые основания находятся внутри, и их плоскости перпендикулярны оси спирали (Каплина, ). Существует еще один способ получения натриевой соли ДНК (Патент РФ № 5) из молок рыб. Он отличается от вышеописанных чем, что после гомогенизации молок в водном растворе хлорида натрия производят удаление белков из комплекса ДНК с помощью обработки протеолитическим ферментным препаратом с последующим выделением чистой натриевой соли ДНК на колонке с анионитом. Таким образом, в настоящее время существует несколько модификаций по сути одного и того же способа получения ДНК из молок различных видов рыб. Получаемые препараты отличаются либо слабой растворимостью в воде либо требуют многостадийное™ процесса получения. Как альтернативу данному методу можно предложить ферментативный способ обработки исходного материала мультиферментными препаратами, включающими нуклеолитические ферменты. Кроме нуклеиновых кислот продукт будет содержать пептиды и свободные аминокислоты, что обеспечит ему новые биологические свойства и расширит область применения препарата.