+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Разработка химических основ увеличения чувствительности анализа пептидов

  • Автор:

    Мосина, Алёна Геннадьевна

  • Шифр специальности:

    02.00.10

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2013

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    120 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы


СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1.Основные способы определения низкокогшйных пептидов. . .
1.1.1. Иммуно-ПЦР
1.1.2. ДНК-аптамеры . . . . . . . .
1.1.3. Полимеразная цепная реакция
1.1.3.1. Принцип метода полимеразной цепной реакции . . .
1.1.3.2. Компоненты реакции
1.1.3.3. Температурные режимы программы ПЦР .
1.1.3.4. Оценка результатов реакции . . . . . .
1.1.3.5. Полимеразная цепная реакция в реальном масштабе времени.
1.1.3.6. Факторы, влияющие на чувствительность и достоверность количественной ДНК-диагностики
1.1.3.7. Визуализация накопления ДНК при проведении ПЦР «в реальном времени»
1.1.3.8. Типы зондов в специфических системах детектирования
1.1.3.8.1. Праймеры-зонды («скорпионы»)
1.1.3.8.2. «Вытесняющие» зонды
1.1.3.8.3. Линейные зонды (TaqMan)
1.1.3.8.4. Зонды «молекулярные маячки» (Molecular beacons) .
1.1.3.8.5. Примыкающие пробы.
1.1.3.8.6. Зонды типа «Perfect probe»
1.2. Анализ аминокислотного состава биологически активных пептидов .
1.2.1. Исчерпывающий гидролиз биологически активных пептидов .
1.2.2. Методы разделения и анализа аминокислот
1.2.3. Капиллярный электрофорез
1.2.4. Особенности капиллярного электрофореза аминокислот . .
1.2.5. Способы детектирования аминокислот
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Реактивы и материалы
2.2. Приборы и оборудование . . . . . . .
2.3. Приготовление рабочих буферных растворов
2.4. Общая методология работы . . . . . . .
2.4.1. Приготовление кислотных гидролизатов природных пептидов .
2.4.2. Анализ смеси стандартных аминокислот и гидролизатов биологически активных пептидов . . . . . . . .
2.4.3. Синтез нуклеопротсиновых конъюгатов
2.4.4. Масс-спектрометрический анализ
2.4.5. Нуклеазный гидролиз
2.4.6. ПЦР в режиме реального времени конъюгата
2.4.7. Синтез олигонуклеотидов, содержащих гексахлорфлуоренильную метку
2.4.8. Очистка зондов методом вертикального гель-электрофореза .
2.4.9. Выделение зондов из ПААГ
2.4.10. ВЭЖХ-очистка НЕХ-зондов
2.4.11. ПЦР в режиме реального времени на основе НЕХ-зондов .
2.5. Статистическая обработка результатов КЭ
2.5.1. Расчет селективности разделения
2.5.2. Оценка воспроизводимости
2.5.3. Оценка правильности
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка принципиальной схемы анализа низкокопийных пептидов с использованием химико-ферментативных систем амплификации сигнала .
3.2. Оптимизация флуоресцентного ПЦР-анализа ДНК в режиме реального времени с использованием зондов, содержащих гексахлорфлуоренильную метку .
3.3. Оптимизация анализа аминокислотного состава биологически активных пептидов без стадии модификации методом капиллярного электрофореза
Приложение А
4. ВЫВОДЫ
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АК - аминокислота
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ГЖХ - газожидкостная хроматография
ГХ - газовая хроматография
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
дНТФ - дезоксирибонуклеозидтрифосфат
РЮХ - ионообменная хроматография
ИФА - иммуноферментный анализ
КЗЭ - капиллярный зональный электрофорез
КЭ - капиллярный электрофорез
МС - масс-спектрометрия
ОФ ВЭЖХ - обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПААГ — полиакриламидный гель
РНК - рибонуклеиновая кислота
СТВ - стрептавидин
Темед - N,N,N',N”- тетраметилэтилендиамин
ТСХ - тонкослойная хроматография
УФ - ультрафиолетовый
ЭОП - электроосмотический поток
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат натрия
ACR-акридин
BHQ2 - 4'-(4-нитро-фенилдиазо)-2'- метокси-5'-метокси-азобензол-4"-(]хГ-этил)-М-этил-2-цианоэтил-(Ы,Х-диизопропил)
BSP - фосфодиэстераза II из селезенки крупного Рогатого скота CMV -цитомегаловирус
Су5-1-(3-(4-монометокситритилокси)пропил)-Г-(3-((2-цианоэтил)-(М,М-
диизопропил)фосфорамидитил)пропил)-3,3,3',3'- тетраметилиндодикарбоциан
EI - ионизация электронным ударом
ESI - ионизация электрораспылением
ТАМ - 6-флуоресцеинил-6-карбоксиамидогексил
HEX - гексахлорфлуоресцеин
IISV - вирус герпеса
MALDI ТОТ MS (Малди) - ионизация с помощью лазерной десорбции из матрицы
Real Time ПЦР - ПЦР в режиме реального времени
ROX - карбокси-Х-родамин
Tris (Трис) - трис(гидроксиметил)аминометан

Ф- Флуорофор (донор флуоресценции) А - Гаситель флуоресценции (акцептор)
Начало полимеризации
Прямой (ф
праймер

Смещение зонда
Обратный
праймер

ная активность ^ф£*. ДНК полимеразы /^N *

Окончание
репликации

З'-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------5'
5*-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------з-
Рис. 18. Схема ПЦР с использованием зондов типа TaqMan
1.1.3.8.4. Зонды «молекулярные маячки» (Molecular beacons)
Зонды по типу «молекулярные маячки» в растворе при температурах ниже 55-60 °С образуют жесткую структуру типа «шпильки» с очень низким уровнем флуоресценции. Флуорофор и гаситель располагаются по концам олигонуклеотида. Данные зонды несут на 3'- и 5'- концах короткие (5-8 пар нуклеотидов) взаимнокомплементарные области, называемые «ножками». Олигонуклеотидная последовательность петли (область между «ножками» зонда) состоит из 15-30 нуклеотидных остатков, которые комплементарны последовательности ДНК -мишени. Флуорофор и гаситель в структуре зонда в виде шпильки находятся близко друг от друга, что позволяет реализовать контактное гашение. При гибридизации с ампликоном зонд «разворачивается», что ведет к существенному повышению уровня флуоресценции за счет увеличения расстояния между флуорофором и гасителем [68, 69, 70, 71]. (рис. 19).

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.142, запросов: 962