Влияние рекомбинантного белка вируса натуральной оспы на биологические эффекты фактора некроза опухолей альфа

• Автор: Басова, Алёна Александровна
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
Часть I. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель и задачи работы
Научная новизна
Теоретическая и практическая значимость работы
Положения, выносимые на защиту
Публикации по теме диссертации
Вклад автора
Часть II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Заболевания, связанные с нарушением продукции ТЫР-а
Участие цитокинов в формировании воспаления при ревматоидном артрите
Нарушение гемопоэза при ревматоидном артрите
Участие высоко реактивных метаболитов кислорода в патогенезе
ревматоидного артрита
Препараты, ингибирующие действия ТЛР-а, и их применение в лечении
воспалительных и аутоиммунных состояний
Осложнения при применении препаратов ингибирующих действие ТЫР-о
Вирусные гомологи рецепторов ТОТ-а и их свойства
Часть III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. МАТЕРИАЛЫ
Реактивы и среды
Животные
3.2. МЕТОДЫ
Оценка числа коммитированных предшественников клеток костного мозга
человека
Оценка числа коммитированных предшественников клетки костного мозга
мышей линии Ва1Ь/с
Облучение животных
Определение количества колониеобразующих единиц селезенки КОЕ-с8
Определение количества форменных элементов крови
Модель коллаген-индуцированного артрита (КИА)
Оценка степени активности КИА
Оценка структурно-метаболических изменений соединительной ткани
Оценка окислительно-метаболической функции лейкоцитов
Оценка содержания цитокинов IL-lß и IL-6 в кондиционной среде культуры на
мононуклеарных клетках крови
Морфологические исследования
Оценка миграции лейкоцитов при эпикутанных аппликациях
Проведение исследований на мононуклеарных клетках крови и клетках
костного мозга условно-здоровых доноров
Статистическая обработка данных
Часть IV. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Исследование влияния VARV-CrmB на колониеобразующую активность ККМ мышей.
4.1.1. Исследование влияния VARV-CrmB в различных концентрациях на колониеобразующую активность ККМ мышей
4.1.2. Исследование влияния rmTNF-a в различных концентрациях на колониеобразующую активность ККМ мышей
4.1.3. Влияние VARV-CrmB на rmTNF-индуцированные изменения
колониеобразующей активности ККМ
4.1.4. Влияние VARV-CrmB на rmTNF-индуцированные изменения
колониеобразующей активности КОЕс
4.2. Исследование колониеобразующей активности ККМ человека
4.2.1. Исследование влияния VARV-CrmB в различных концентрациях и TNF AbTNF в концентрации 60 нг/мл на колониеобразующую активность ККМ человека
4.2.2. Исследование влияния rhTNF в различных концентрациях на колониеобразующую активность ККМ человека
4.2.3. Влияние VARV-CrmB на rhTNF-индуцированные изменения
колониеобразующей активности ККМ человека
4.2.4. Влияние антител к TNF-a на rhTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ человека
4.3. Оценка влияния VARV-CrmB на функциональную активность мононуклеарных клеток
4.3.1. Влияние VARV-CrmB на TNF-индуцированную продукцию цитокинов IL-lß и IL
4.3.2. Оценка влияния вирусных белков на окислительно-метаболическую функцию клеток

4.4. Исследование противовоспалительныъх эффектов VARV-CrmB в модели коллаген-индуцированного артрита
4.4.1. Сравнительная оценка клинических проявлений КИА при введении поли-AbTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB
4.4.2. Изменение показателей периферической крови мышей в динамике развития КИА и при введении поли-AbTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB
4.4.3. Состояние костномозгового кроветворения мышей в динамике развития КИА и при введении поли-AbTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB
4.4.4. Изменение коллагенолитической активности сыворотки крови и содержания суммарных сывороточных гликозаминогликанов в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей и при введении поли-AbTNF и VARV-CrmB
4.4.5. Состояние окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови мышей в динамике развития КИА и при введении поли-AbTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB
4.4.6. Состояние эритроидного ростка в динамике развития КИА и при введении поли-AbTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB
4.4.7. Патоморфологические изменения тибиотарзального сустава мышей в динамике развития КИА и при введении поли-AbTNF и TNF-связывающего
белка вируса натуральной оспы VARV-CrmB
4.5. Изучение влияния rmTNF и VARV-CrmB на миграционную и окислительно-метаболическую функцию лейкоцитов, а также костномозговой гемопоэз мышей при эпикутанном способе воздействия
Часть V. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

атмосфере, содержащей 5% С02. Затем клетки собирали: отсасывали среду в центрифужные пробирки, вносили в каждую лунку по 100 мкл культуральной среды с 0,25% трипсином, инкубировали при 37 °С, затем вносили по 200 мкл полной среды RPMI1640, смывали прилипшие клетки и объединяли с первой порцией клеток в центрифужных пробирках. Клетки концентрировали центрифугированием при 1500 об/мин. Количество клеток, мигрировавших из одного уха, подсчитывали в камере Горяева.
Подсчет количества лейкоцитов периферической крови проводили при помощи гематологического анализатора РСЕ-90 (ERMA Inc., Япония).
ОМ функцию лейкоцитов крови оценивали по спонтанной (Cn-Isum) и зимозан-индуцированной (ZA-Isum) люминол-зависимой хемилюминесценции (ХЛ) [Tono-oka T. et al., 1983]. Регистрацию интенсивности XJÏ свечения каждой пробы осуществляли ежеминутно в течение 20 мин. Результаты ХЛ исследования выражали как Isum=n- имп/Кл/20 мин, где п - число импульсов, испускаемых клеткой в течение 20 минутного исследования.
Для оценки реактивности лейкоцитов добавляли суспензию дрожжевого полисахарида зимозана A (ZA) («Sigma», США) в концентрации 5 мг/мл и рассчитывали индекс стимуляции (ИС) по формуле: HC=ZA-Isum/Cn-Isum.
Результаты расчета ИС выражали в усл.ед.
Все измерения интенсивности ХЛ ответа клеток проводили с помощью мультимодального планшетного ридера «LB 941 TriStar» («Berthold Technologies», Германия).
При проведении исследований на мононуклеарных клетках крови и клетках костного мозга у всех доноров было получено информированное согласие на использование данных обследования в научных целях и согласие этического комитета на проведение исследования.
В работе с обследуемыми людьми соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации