Роль полиморфных генов программируемой клеточной гибели, Т-лимфоцитов и дендритных клеток в патогенезе псориаза

• Автор: Хайрутдинов, Владислав Ринатович
• Шифр специальности: 14.01.10
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 230 с. : 51 ил.

Оглавление

Введение
ГЛАВА 1. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
ПАТОГЕНЕЗА ПСОРИАЗА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Общие сведения о псориазе
1.2. Гены предрасположенности псориаза
1.2.1. Роль апоптоза в патогенезе псориаза
1.2.2. Регуляция программируемой клеточной гибели
1.2.2.1. Рецепторы семейства фактора некроза опухолей
1.2.2.2. Семейство цистеиновых протеаз
1.2.2.3. Семейство белков Вс
1.2.2.4. Другие участники апоптоза
1.2.3. Полиморфизм гена 1Ь12В
1.2.4. Полиморфизм гена ТКАЕ31Р2
1.3. Современные представления об иммунных механизмах развития
псориаза
1.3.1. Роль Т-лимфоцитов в патогенезе псориаза
1.3.1.1. Т-хелперы 1 типа
1.3.1.2. Т-хелперы 17 типа
1.3.1.3. Т-регуляторные лимфоциты
1.3.1.4. Т-клетки памяти
1.3.2. Роль дендритных клеток в патогенезе псориаза
1.3.3. Участие лимфоидной ткани, ассоциированной с кожей, в патогенезе псориаза
1.4. Резюме
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общая характеристика больных
2.2. Оценка частоты генных полиморфизмов в группах больных

псориазом и здоровых доноров
2.2.1. Выделение ДНК из лейкоцитов
2.2.2. Генотипирование
2.2.2.1. Выбор генов-кандидатов и генных полиморфизмов
2.2.2.1.1. Полиморфные гены программируемой клеточной гибели
2.2.2.1.2. Полиморфные гены цитокина ПЛ2В и адаптера ТЬп-лимфоцитов -ТКАБЗПЦ
2 2 2 2 Аллель—СПеТТтдЛтхттГТ<,°" * * ТТЭ т> «ламстг» /тлоттт ттлггч пможжатттхчч /лС
2.2.2.3. Контроль результатов ПЦР-амплификации
2.2.2.4. Рестрикционный метод ПЦР
2.3. Анализ уровня экспрессии мРНК генов в коже
2.3.1. Проведение биопсии кожи
2.3.2. Выделение мРНК из срезов кожи
2.3.3. Определение экспрессии мРНК генов в коже
2.4. Определение содержания Т-регуляторных клеток в
периферической крови
2.5. Микроскопическое исследование кожи
2.5.1. Гистологическое исследование
2.5.2. Непрямой иммуногистохимический метод исследования
2.6. Статистический анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ОБРАЗЦОВ ДНК
3.1. Анализ распределения генотипов и аллелей полиморфных генов
программируемой клеточной гибели
3.1.1. Ген ОК4С1и228А1а (А228С)
3.1.2. Ген 01441Аг§ (А44Ю)
3.1.3. Ген Сазр1011е479Ееи (А479Т)
3.1.4. Ген р53Ащ72Рго (072С)
3.1.5. Генные полиморфизмы, которые были исключены из
ч исследования

3.1.6. Генные полиморфизмы, которые не были обнаружены в
исследованных выборках
3.1.7. Полиморфные гены апоптоза, у которых не обнаружена

ассоциация с предрасположенностью к псориазу
3.2. Ген 1Ы2В А/Т гз12188300
3.3. Ген ТЯАР31Р2 Тгр74Агё (А740)
3.4. Резюме
ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ мРНК ГЕНОВ В
КОЖЕ БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ И ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ
4.1. Ген ГОХРЗ
4.2. ГенТОБа
4.3. ГенТРАЕ31Р2
4.4. Ген 1Ы711А
4.5. Резюме
ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА Т-РЕГУЛЯТОРНЫХ
ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ
5.1. Относительное и абсолютное содержание Т-регуляторных клеток в
периферической крови
5.2. Резюме
ГЛАВА 6. МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОЖИ БОЛЬНЫХ
ПСОРИАЗОМ И ЗДОРОВЫХ ЛИЦ
6.1. Гистологическое исследование срезов кожи
6.2. Иммуногистохимическое исследование срезов кожи
6.2.1. Результаты иммуногистохимического исследования кожи с
маркерами В-лимфоцитов
6.2.1.1. СО20+-клетки
6.2.1.2. СП79а+-клетки
6.2.1.3. Рах5+-клетки
6.2.2. Результаты иммуногистохимического исследования кожи с

IL23. Два других гена - IL12A и IL23A - кодируют уникальные субъединицы: интерлейкина-12 - р35 и интерлейкина-23 - р19, соответственно. IL12 секретируется антигенпрезентирующими клетками и отвечает за дифференцировку наивных Tho-лимфоцитов в субпопуляцию Thi-клеток, продуцирующих интерлейкин-2, фактор некроза опухолей-а и интерферон-у. IL23 вовлечен В дифференцировку Tho-лимфоцитов В Th) у-клетки, которые секретируют мощные провоспалительные цитокины - фактор некроза опухолей-а и интерлейкин- 17A/F, а также интерлейкин-22, вызывающий усиленную пролиферацию, нарушение дифференцировки кератиноцитов и развитие акантоза в эпидермисе [Кубанова A.A., 2010а, Nestle F.О. et al., 2009].
До недавнего времени считалось, что центральное место в патогенезе псориаза принадлежит только продукции IL12 и увеличению субпопуляции Т-хелперов I типа. Последние исследования показали важную роль цитокина IL23 [Nair R.P. et al., 2010] . В псориатических очагах наблюдается избыточная, по сравнению с непораженной кожей, продукция р40 и р19, но не р35, что указывает на преобладание девиации цитокинового профиля в сторону Тй17-клеток [Lee E. et al., 2004]. Нейтрализация IL12 и IL23 моноклональными антителами анти-р40 (устекинумаб) приводит к разрешению псориатических высыпаний и свидетельствует о причастности обоих цитокинов к развитию псориаза [Krueger G.G. et al., 2007].
Результаты исследования ассоциаций полиморфизмов гена IL12B с предрасположенностью к псориазу имеют противоречивый характер. Так, Nair R.P. и соавт. (2008) исследуя больных псориазом европеоидной расы, проживающих в Германии и США, выявили ассоциацию между полиморфизмами rs3212227 (идентификационный номер однонуклеотидной замены в специализированной электронной базе данных Национального Центра Биотехнологической Информации),
расположенном в З'-нетранслируемом участке гена IL12B, и rs68 87695, локализующимся в межгенной области, и псориазом [Nair R.P. et al., 2008]. Elder J.T. (2009) провел полногеномный анализ на больших группах и обнаружил