Нарушения апоптоза клеток-мишеней при различных вариантах бронхиальной астмы

• Автор: Нестерович, Ирина Ивановна
• Шифр специальности: 14.00.43
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 292 с. : 3 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Апоптоз, его роль в организме и регуляция
1.2. Апоптоз и воспаление при бронхиальной астме
1.3. Изучение функциональной активности лимфоцитов на основе оценки активности ядрышковых организаторов
1.4. Цитоскелет и поверхностная архитектоника эриторцитов
1.5. Роль дисфункции эндотелия в развитии аллергического воспаления
1.6. Роль эпителия дыхательных путей в развитии аллергического воспаления
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клиническая характеристика обследованных больных
2.2.1. Исследование экспрессии СБ95/Ра8/АРО-1 рецепторов на лимфоцитах периферической крови
2.2.2. Определение экспрессии фосфатидилсерина на лимфоцитах периферической крови с помощью Аппехт У-ЫТС/Р! окрашивания
2.2.3. Определение активности каспазы 3 в лимфоцитах периферической крови
2.2.4. Оценка морфологических признаков спонтанного и индуцированного дексаметазоном, адреналином, пероксидом водорода апоптоза мононуклеаров и гранулоцитов периферической крови с помощью суправитального флюорохромирования акридиновым оранжевым
2.2.5. Серебрение ядрышек лимфоцитов периферической крови
2.2.6. Исследование поверхностной архитектоники эритроцитов в условиях модулирующего влияния адреналином, фитогемагглютинином, экзогенным циклическим аденозинмонофосфатом
2.2.7. Метод определения циркулирующих в крови десквамированных эндо-телиоцитов
2.2.8. Определение экспрессии Вс1-2, Вах, активности каспазы 3 в бронхиальных эпителиальных клетках методом иммуногистохимического исследования
2.3. Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Характеристика Fas-опосредованного апоптоза по активности спонтанной экспрессии CD95/Fas/APO-l рецепторов на лимфоцитах периферической крови
3.2. Результаты исследования апоптоза лимфоцитов периферической крови с помощью Annexin V-FITC/PI окрашивания
3.3. Характеристика апоптоза лимфоцитов периферической крови на основе оценки активности эффекторной каспазы
3.4. Результаты исследования апоптоза мононуклеаров и гранулоцитов периферической крови методом суправитального флюорохромирования акридиновым оранжевым
3.5. Оценка активности ядрышковых организаторов лимфоцитов периферической крови
3.6. Характеристика адренореактивной, ФГА-реактивной и цАМФ-реактив-ной систем на основе оценки поверхностной архитектоники эритроцитов
3.7. Исследование эндотелиальной дисфункции на основе оценки количества циркулирующих эндотелиальных клеток
3.8. Оценка активности генов-регуляторов апоптоза по экспрессии Вс1-2, Вах, активности каспазы 3 в бронхиальных эпителиальных клетках у больных
бронхиальной астмой
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

иГКС
сГКС
ЛПВП
лпнп
лпонп

МАЛТ ванная со слизистыми МОС 50 50% ФЖЕЛ МОС 75 75% ФЖЕЛ НАБА ООЛ ОФВ1 кунду ПКА ПКГ ПКС ПОЛ ПОС РНК
Аллергическая бронхиальная астма Антигенпрезентирующие клетки Активные формы кислорода Бронхиальная астма Биологически активные вещества Бронхоальвеолярный лаваж Глюкокортикостероиды Дезоксирибонуклеиновая кислота Жизненная емкость легких Ингаляционные глюкокортикостероиды Системные глюкокортикостероиды Липопротеиды высокой плотности Липопротеиды низкой плотности Липопротеиды очень низкой плотности Липополисахарид
Мукозно-ассоциированная ткань, ассоцииро-
Максимальная объемная скорость выдоха при
Максимальная объемная скорость выдоха при
Неаллергическая бронхиальная астма Остаточный объем легких
Объем форсированного выдоха за первую се-Протеинкиназа А
Программированная клеточная гибель Протеинкиназа С Перекисное окисление липидов Пиковая объемная скорость выдоха Рибонуклеиновая кислота

тотически измененных Т-лимфоцитов в биоптатах бронхов больных БА по сравнению с больными хроническим бронхитом и здоровыми (Vignola А. М., Chanez P., Chiappara G. et al., 1999). Сравнение Т-лимфоцитов крови здоровых и больных БА продемонстрировало практически одинаковую степень экспрессии Bcl-2, Fas, Вах и CD25. При этом инкубация Т-лимфоцитов с ГКС независимо от принадлежности лимфоцитов показала их одинаковую реакцию в ответ на IL-2 в виде усиления апоптоза, связанного с активизацией Bax/Bcl-2, при одновременном снижении представительства Fas и CD25 (Melis М., Siena L., Расе Е. et al., 1999).
Неоднозначные данные исследователей, касающиеся участия апоптоза Т-лимфоцитов в регуляции воспаления при БА, связаны, по-видимому, с разными методическими подходами к изучаемому вопросу. Р1есомненным следует признать факт нарушения апоптоза субпопуляций Т-лимфоцитов и их кооперативного взаимодействия с другими эффекторными и структурными клетками дыхательных путей.
Возможно, одной из причин снижения Fas-зависимого апоптоза Т-лимфоцитов является отсутствие субстрата для рецепторного сигнала на повер-

хности CD4~CD8“ субпопуляций (Simon H. U., Yousefi S., Dommann-Scherrer C. C. et al., 1996). Дефектные клоны.Т-лимфоцитов выделяют цитокины, обладающие антиапоптотической активностью, и способны участвовать в формировании гиперэозинофилии и хронизации воспаления (Simon H.U., Yousefi S., Dommann-Scherrer C.C. et al., 1996; Simon H.U., 1999).
Представляет интерес исследование F. Spinozzi et al. (1998), изучавших экспрессию информационной РНК Fas (иРНК) и поверхностного рецептора Fas в CD3+ Т-лимфоцитах БАЛ у больных с впервые установленной БА и у здоровых, которое позволило установить отсутствие активности Fas и его иРНК в первом случае, тогда как другие активаторы апоптоза - CD25, HLA-DR, CD45RO - были представлены. Стимуляция Fas-рецептора моноклональными антителами в опытах in vitro не приводила к апоптозу Т-лимфоцитов больных в отличие от здоровых. По мнению исследователей, снижение экспрессии иРНК Fas на CD3+ Т-лимфоцитах может принимать участие в персистенции аллергического воспаления при БА.
Недостаточное вступление в апоптоз активированных Т-лимфоцитов