Разработка и применение методов диагностики метапневмовирусной инфекции птиц

• Автор: Никонова, Зоя Борисовна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 140 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
а. о. - аминокислотный остаток
БСА - бычий сывороточный альбумин
ГТЦ - гуанидинтиоционат
ДМСО - диметилсульфоксид
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДСН - додецилсульфат натрия
ИАЦ - инфекионная анемия цыплят
ИБК - инфекционный бронхит кур
ИФА - иммуноферментный анализ
ИЦХА - иммуноцитохимический анализ
КББ - карбонатно-бикарбонатный буфер
кДНК - ДНК-копия с РНК-матрицы
мкАТ - моноклональные антитела
МПВ - метапневмовирус
н. - нуклеотиды
н-ИФА - непрямой вариант иммуноферментного анализа ОП - оптическая плотность ОРС - открытая рамка считывания ОТ - обратная транскрипция
ОТ-ПЦР-РВ - обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция в
режиме реального времени
ПААГ - полиакриламидный гель
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РЭК - развивающиеся эмбрионы кур
с-ИФА - «сэндвич»-вариант иммуноферментного анализа
СПК - сыворотка плода коров
ТБЕ - трис-боратный буфер
ТБС-Т - солевой трис буфер с добавлением твин
ТМБ - 3,3',5,5"-тетраметилбензидин
ТЦД50 - 50%-ная тканевая цитопатическая доза
ФБР - фосфатно-буферный раствор
ФЭК - фибробласты эмбрионов кур
ЦД5о - 50%-ная цилиостатическая доза
ЦПД - цитопатическое действие
аМРУ - avian Metapneumovirus
dNTP - дезоксинуклеотидтрифосфаты
SPF - свободный от специфических патогенов

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Мехапневмовирусная инфекция птиц
1.1.1. Исторические и эпизоотологические данные
1.1.2. Патогенез
1.1.2.1. Клинические признаки
1.1.2.2. Тропизм вируса и патологоанатомические изменения
1.1.2.3. Иммунитет при метапневмовирусной инфекции птиц
1.1.3. Специфическая профилактика
1.2. Характеристика МПВ птиц
1.2.1. Классификация
1.2.2. Строение и состав
1.2.3. Свойства
1.2.4. Устойчивость к физическим и химическим факторам
1.2.5. Цикл репродукции
1.3. Диагностика метапневмовирусной инфекции птиц
1.3.1. Молекулярные методы диагностики
1.3.2. Выделение вируса
1.3.3. Серологические методы диагностики
1.3.4. Гибридомная технология
1.4. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и оборудование
2.1.1. Образцы патологического материала
2.1.2. Штаммы микроорганизмов
2.1.3. Сыворотки и пероксидазные конъюгаты антител
2.1.4. Последовательности МПВ птиц из базы данных СепВапк
2.1.5. Ферменты и дезоксинуклеозидтрифосфаты
2.1.6. Праймеры

Research», Австралия); программируемый амплификатор «Терцик» («ДНК-технология») или аналогичный прибор другой фирмы; автоматический секвенатор ABI Prism 3100 («Applied Biosystems»); С02-инкубатор; микроскоп световой инвертированный; холодильник бытовой с температурными режимами 4°С и минус 20°С; низкотемпературные холодильники с температурными режимами минус 70°С и минус 150°С; насос вакуумный с емкостью для сбора жидкостей; спектрофотометр-ридер со светофильтром 450 нм; гельдокументирующая система «Gel Doc XR» («BioRad»); термостат для микропробирок, поддерживающий температуру 65°С; микроцентрифуга, развивающая ускорение до 16000 g; СВЧ-печь; рН-метр любой конструкции; аппарат для горизонтального электрофореза; аппарат для вертикального электрофореза; трансиллюминатор для просмотра электрофореграмм фрагментов нуклеиновых кислот в ультрафиолетовом излучении; дозатор для серологических пипеток; дозаторы одноканальные и многоканальные с переменным объемом, позволяющие отбирать объемы жидкости в пределах от 0,25 до 1000 мкл; камера Горяева; инструменты (пинцеты, ножницы).
2.1.12. Расходные материалы. При выполнении работы использовали следующие материалы: наконечники одноразовые для дозаторов,
рассчитанные на объем жидкости до 10, 200 и 1000 мкл; микропробирки полипропиленовые типа Eppendorf, объем 05, и 1,5 мл; микропробирки полипропиленовые для проведения ПЦР в режиме реального времени, объем
0.1 или 0,2 мл; пипетки серологические градуированные стерильные, объем
1, 5, 10 мл; криопробирки полипропиленовые разного объема; планшеты культуральные плоскодонные 6-, 24- и 96-луночные; планшеты полистироловые иммунологические плоскодонные 96-луночные MaxiSorp («Nunc», Дания); стекловолокнистые фильтры GF/F («Whatman», Великобритания); пробирки центрифужные разного объема; шприцы инъекционные однократного применения, объем 5 мл; шприцевые фильтрующие насадки Millex GP® («Millipore») с размером пор 0,22 мкм;