Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Bordetella bronchiseptica и разработка на их основе биопрепарата для индикации и идентификации

• Автор: Семанина, Екатерина Николаевна
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Таксономическая характеристика бактерий рода Bordetella
1.2. Распространение, источники заражения, факторы передачи
В. bronchiseptica
1.3. Биологические свойства возбудителя
1.4. Патогенез и патологоанатомическая картина
1.5. Идентификация В. bronchiseptica
1.5.1. Бактериологические методы идентификации В. bronchiseptica
1.5.2. Иммунологические методы идентификации В. bronchiseptica
1.5.3. Генетические методы идентификации В. bronchiseptica
1.6. Бактериофаги и их применение в диагностической практике, выделение бактериофагов, биологические свойства бактериофагов
1.7. Фагоидентификация и фаготипирование бактерий
1.8. Реакция нарастания титра фага
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект, материалы и методы исследований
2.1.1. Материалы
2.1.2. Методы
2.2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1. Выделение и идентификация В. bronchiseptica
2.2.2. Выделение бактериофагов В. bronchiseptica
2.2.2.1. Характеристика биологических свойств выделенных бактериофагов
2.2.3. Разработка параметров ускоренной идентификации
В. bronchiseptica с помощью бактериофагов
2.2.4. Разработка оптимальных условий постановки РНФ

2.2.4.1. Использование РНФ для выявления В. bronchiseptica
у домашних животных и в объектах внешней среды
2.2.4.2. Исследование с помощью РНФ проб физиологического раствора, искусственно контаминированного В. bronchiseptica
2.2.4.3. Исследование с помощью РНФ смывов, с глотки собак
и кошек, искусственно контаминированных В. bronchiseptica
2.2.4.4. Исследование с помощью РНФ фекалий,
искусственно контаминированных В. bronchiseptica
2.2.5. Разработка технологических параметров изготовления
и контроля диагностического фагового биопрепарата
2.2.5.1. Изучение эффективности сконструированного
биопрепарата бордетеллезных фагов «B.br. - 11 УГСХА
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
КОЕ - колониеобразующие единицы
м.к./мл - количество микробных клеток в 1 мл
м.к./мл - количество микробных клеток в 1 мл
МПА - мясопептонный агар
МПБ - мясопептонный бульон
ПЦР - полимеразно-цепная реакция
РА - реакция агглютинации
РДП - реакция диффузной преципитации
РИФ - реакция иммунофлюоресценции
РНФ - реакция нарастания титра фага
УФЛ - ультрафиолетовые лучи
ЦНС - центральная нервная система
X - время облучения бактерий УФЛ, минуты
/ - расстояние, метры

1.7. Фагоидентификация бактерий и фаготипирование
Фаготипирование это способ определения принадлежности выделенной и идентифицированной до вида культуры к тому или иному фаговару. Используют 2 подхода. Сущность первого состоит в установлении свойств, полученных из лизогенной культуры фагов (литического спектра, антигенной специфичности и др.). Сущность второго, более распространенного, подхода базируется на выявлении спектра чувствительности выделенной культуры к набору стандартных типовых фагов. Если фаговар культуры соответствует типовому фагу, наступает лизис культуры, проявляющийся в отсутствии роста, в то время как на месте нанесения др. фагов наблюдается сплошной рост микробов. Для фаготипированиянеобходимы молодая (4 - 6-часовая) культура исследуемого штамма, идентифицированного до вида или подвида; набор стандартных типовых фагов в критических тест-разведениях (в максимальном разведении фага, вызывающем сплошной лизис гомологичной культуры); чашки Петри со стандартной свежеприготовленной и хорошо высушенной средой. Культуру засевают сплошным газоном на чашку Петри с питательной средой, дают ей впитаться в агар и на поверхность посева пастеровской пипеткой, штампом-репликатором или калиброванной петлей наносят типовые фаги. На второй день учитывают спектр чувствительности культуры к фагам и сопоставляют со схемой фаготипирования. Результаты используют для эпидемиологического анализа.
Если роль бактериофага, как средства терапии и профилактики некоторых инфекционных заболеваний, в настоящее время невелика, то в лабораторной диагностике ряда инфекций этот биологический объект не только утратил своего значения, а наоборот, начал привлекать к себе все более пристальное внимание исследователей. С каждым годом повышается значимость бактериофагов как высоко специфичного диагностического средства, позволяющего надежно дифференцировать возбудителей болезней (Ганюшкин, 1984; Золотухин, 1995; Разработка технологии приготовления