Роль молекулярно-цитогенетических исследований хромосомных аномалий соматических и половых клеток при нарушении репродуктивной системы у пациентов мужского пола

• Автор: Шаронин, Василий Олегович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Аномалии гоносом при нарушении репродуктивной
системы
1.2. Гены, структура и функции хромосомы Y человека
1.2.1. Гены короткого плеча хромосомы Y
1.2.2. Гены длинного плеча хромосомы Y
1.2.3. Псевдоаутосомные районы гоносом
1.3. Структурные аномалии хромосомы Y
1.3.1. Нефлюоресцирующая хромосома Y
1.3.2. Делении хромосомы Y
1.3.3. Кольцевые хромосомы Y
1.3.4. Y/гоносомные транслокации
1.3.5. Y/аутосомные транслокации
1.4. Анеуплоидии гоносом
1.4.1. Синдром Клайнфельтера
1.4.2. Полисомии гоносом у мужчин
1.4.3. Мозаичные случаи анеуплоидий гоносом
1.4.4. Маркерные хромосомы
1.5. Аномалии аутосом при нарушении
репродуктивной системы
1.6. Цитогенетический и молекулярно-цитогенетический
анализ хромосомных аберраций
1.6.1. Классическая цитогенетическая диагностика
1.6.2. Молекулярно-цитогенетический анализ
аномалий хромосом
1.6.3. Хромосомоспецифичные ДНК-зонды
1.6.4. Радиоизотопная гибридизация нуклеиновых кислот в
условиях in situ: преимущества и недостатки
1.6.5. Флюоресцентная гибридизация нуклеиновых кислот в
условиях in situ (FISH)
1.6.6. Интерфазная молекулярно-цитогенетическая диагностика хромосомных аномалий
1.7. Анеуплоидии хромосом на разных стадиях развития
мужских половых клеток человека
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. Объект исследования
2.2. Цитогенетический метод
2.2.1. Культивирования лимфоцитов периферической крови, приготовление препаратов метафазных хромосом
и интерфазных клеток
2.2.2. G-окрашивание хромосом
2.2.3. С-окрашивание хромосом
2.2.4. Принцип анализа хромосомных препаратов
2.3. Анализ половых клеток
2.3.1. Спермиологический анализ
2.3.2. Метод получения препаратов тотальных ядер половых
клеток из эякулята
2.3.3. Количественный цитологический анализ состава половых
клеток эякулята
2.4. Молекулярно-цитогенетический метод
2.4.1. ДНК-полимеразная реакция замещения (ник-трансляция)
2.4.2. Радиоизотопная гибридизация ДНК на метафазных
хромосомах в условиях in situ
2.4.3. Флюоресцентная гибридизация in situ: FISH на препаратах соматических и половых клеток с использованием проб,
меченных различными флюорофорами
2.5. Статистическая обработка полученных результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ...63.
3.1. Цитогенетическое исследование соматических клеток пациентов с нарушением репродуктивной системы
3.1.1. Цитогенетическое исследование соматических клеток мальчиков с нарушением полового развития
3.1.2. Цитогенетическое исследование соматических клеток
половозрелых мужчин с нарушением репродуктивной функции
3.2. Молекулярно-цитогенетическое исследование хромосомных
аберраций в соматических клетках
3.3. Определение удельного веса нерасхождения хромосом в мужских
половых клетках
3.3.1. Исследование незрелых половых клеток эякулята и сперматозоидов у пациентов с кариотипом 46,ХУ
3.3.2. Исследование незрелых половых клеток эякулята и сперматозоидов у пациентов с нарушениями кариотипа
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

классическом анализе (Ворсанова, Юров, 1987; Yunis, 1981). Благодаря использованию микроцитогенетического метода стало возможным выявление микроструктурных перестроек хромосом: микроделеций, микродупликаций, микротранслокаций. С помощью нового метода были выявлены микрохромосомные аномалии при синдромах Прадера-Вилли, Ангельмана, Корнелии де Ланге и других (Korenberg, Chen, 1995).
На основе изучения прометафазных хромосом были значительно расширены возможности диагностики хромосомных аномалий. Однако, оставался нерешенным ряд проблем, связанных с диагностикой отдельных форм хромосомной патологии, таких как, дополнительные или мини-хромосомы, сложные случаи хромосомного мозаицизма с небольшой долей аномальных клеток, уточнение точек разрыва в гетерохроматиновых районах хромосом, а также структурные перестройки с участием трех и более хромосом.
Разработка методов молекулярно-цитогенетической диагностики позволила существенно расширить возможности решения данной проблемы (Ворсанова, 1991).
1.6.2. Молекулярно-цитогенетический анализ аномалий хромосом.
Среди методов диагностики нарушений репродуктивной системы, в первую очередь, следует выделить метод гибридизации in situ меченных проб ДНК с хромосомами человека. Первоначально он был использован для картирования повторяющихся последовательностей, включая локусы классических и альфа-сателлитных ДНК (Gall, Pardue, 1971; Gosden et al., 1975). В настоящее время для картирования последовательностей ДНК используется целый ряд молекулярно-генетических, и молекулярно-цитогенетических методов, одним из которых является ISH.
Методы молекулярно-цитогенетической идентификации хромосомных нарушений, основанные на использовании особого типа клонированных фрагментов ДНК человека - хромосомоспецифичных ДНК-проб, позволяют определить особенности хромосомного набора соматических и половых клеток без прямого цитогенетического анализа (Юров, 1984; Ворсанова, Юров, 1987; Macgregor, Varley, 1983; Pinkel et al., 1986). Используя молекулярно-цитогенетический метод исследователи выявляют и анализируют нормальные или аномальные гомологичные хромосомы в клетках различной степени дифференцировки и практически на всех стадиях клеточного цикла (Ворсанова, 1991;