Свойства 6-фосфоглюконатдегидрогеназы печени крысы и ее роль в регуляции гексозомонофосфатного пути при В/I-недостаточности у животных

• Автор: Маглыш, Сабина Степановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Гродно
• Количество страниц: 145 c. : ил

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Сравнительная характеристика 6-фосфо-глюконатдегидрогеназы из различных источников
1.2. Способы регуляции активности 6-фосфо-глюконатдегидрогеназы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. МЕТОДИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ
2.1. Основные экспериментальные модели
2.2. Методы исследования
Глава 3. ОЧИСТКА И НЕКОТОРЫЕ СВОЙСТВА МОЛЕКУЛЯРНЫХ ФОРМ
6-Ф0СФ0ГЛЮК0НАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ
3.1. Выделение и очистка фермента
3.2. Стабильность 6-фосфоглюконатдегидрогена-зы
3.3. Гомогенность фермента, его молекулярная масса и субъединичный состав
3.4. Влияние ионной силы раствора, концентрации ферментного белка и pH среды на активность фермента
3.5. Термостабильность 6-фосфоглюконатдеги-дрогеназы и влияние температуры на скорость катализируемой ею реакции
3.6. Влияние ионов на активность фермента
3.7. Внутриклеточный синтез и распад изоформы В 6-фосфоглюконатдегидрогеназы
Глава 4. СТАЦИОНАРНАЯ КИНЕТИКА РЕАКЦИИ, КАТАЛИЗИРУЕ-

МОЙ 6-Ф0СФ0ГЛЮК0НАТДЕГИДР0ГЁНА30Й ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ
4.1. Зависимость скорости 6-фосфоглкжонатде-гидрогеназной реакции от концентрации субстратов и вьиснение общего механизма катализа
4.2. Ингибирование 6-фосфоглюконатдегидроге-назы продуктами катализируемой ею реакции
4.3. Роль некоторых метаболитов клеточного обмена как модуляторов активности 6-фос-фоглюконатдегидрогеназы
Глава 5. РЕГУЛЯЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОЙ ВЕТВИ ПЕНТ030Ф0СФАТ-НОГО ПУТИ НА УРОВНЕ 6-Ф0СФ0ГЛЮК0НАТДЕГИДР0-ГЕНАЗЫ В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ Вj-НЕДОСТАТОЧНОСТИ, ВЫЗВАННОЙ ВВЕДЕНИЕМ ОКСИТИАМИНА ЗДОРОВЫМ ЖИВОТНЫМ И КРЫСАМ-ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЯМ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

Г-6-Ф
Г-6-Ф дг
Г-1,6-диФ
ДС-їїа
ЗШ>+
М)Н
ЇЇАВР+
ЇЇАБРН

Р-5-Ф
Ри-5-Ф

6-ФГ
6-ФГ ДГ

ФМС*Н2
Ф-І-Ф
Ф-6-Ф
Ф-1,6-диФ
сАМР

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ
- аденозинмонофосфат
- аденозиндифосфат
- аденозинтрифосфат
- глюкозо-6-фосфат
- глюкоэо-6-фосфатдегидрогеназа
- глюкозо-1,6-дифосфат
- додецилсульфат натрия
- никотинамидцинуклеотид
- никотинамидцинуклеотид восстановленный
- никотинамиддинуклеотидфосфат
- никотинамиддинуклеотидфосфат восстановленный
- пентозофосфатный путь
- рибозо-5-фосфат
- ри було зо-Ь-фо сфат
- транскетолаза
- 6-фосфоглюконат
- 6-фосфоглюконатдегидрогеназа
- феназинметосульфат
- феназинметосульфат восстановленный
- фруктозо-1-фосфат
- фруктозо-6-фосфат
- фруктозо-1,6-дифосфат
- циклический аденозинмонофосфат
- молекулярная масса
- ионная сила раствора
- константа Михаэлиса
- константа диссоциации фермент-субстратного комплекса
- константа диссоциации комплекса фермент-ингибитор

центах от максимальной скорости реакции, катализируемой данным ферментом.
2.2.5. Определение гомогенности препаратов 6-ФГ ДГ Степень чистоты выделяемого фермента оценивали методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле, обладающим высокой разрешающей способностью.
Диск-электрофорез очищенных белковых препаратов проводили в 7%-ном полиакриламидном геле (91) с использованием трис-глицино-вого электродного буфера, pH 8,3, на приборе фирмы ”йеапа1 " (Венгрия), модель-69. Длительность электрофореза - 3 ч при силе тока 2 мА на трубку, температура - 4°С. Электрофореграммы окрашивали 1%-ным раствором амидочерного в течение 15 мин, а затем отмывали 7%-ной уксусной кислотой.
Окраску на специфическую активность проводили погружением геля в 5 мл триэтаноламинового буфера (0,2 М; pH 7,6), содержащего I мМ МБР4, 2 мМ 6-ФГ, 1,5 мг тетразолиевого нитроголубого и 0,15 мг феназинметосульфата, с последующей инкубацией при 37°с в течение 30 мин (159).
2.2.6. Определение молекулярной массы нативной 6-ФГ ДГ Молекулярную массу нативного фермента определяли методом гель-фильтрации через сефадекс Г-150 (колонка 2,5x80 см), уравновешенный 10 мМ триэтаноламиновым буфером, pH 7,4. В качестве белков с известной молекулярной массой использовали папаин (М= 20500), гемоглобин (М = 67000), бычий сывороточный альбумин (димер) (М = 136000), лактатдегидрогеназу из мышц кролика (М = 140000), транскетолазу из печени крысы (М = 140000). Свободный объем колонки устанавливали с помощью голубого декстрана. Величину молекулярной массы 6-ФГ ДГ определяли из линейной графической зависимости Уэ/у0 от М (44), где Уэ - объем элюента, необходимый для выноса исследуемого белка из колонки; У0