Получение и сравнительный анализ свойств гиалуронидаз из различных источников

• Автор: Заинкова, Наталья Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 142 с.

Содержание
Введение
Обзор литературы
1.1. Источники получения ферментных препаратов
1.1.1. Растительное сырье
1.1.2. Органы и ткани животных и рыб
1.1.3. Микроорганизмы
1.2 Гналуронидазы. Сравнительный анализ биологических
и физико-химических свойств гиалуронидаз из различных источников. Методы выделения и очистки гиалуронидаз
1.2.1. Бактериальные гналуронидазы
1.2.2. Гналуронидазы из слюны пиявок и гельминтные гналуронидазы
1.2.3. Тестикулярные гналуронидазы
1.2.4. Выделение и очистка гиалуронидаз
13. Общие принципы и особенности выделении и очистки
ферментов из экстрактов и культуральных жидкостей
1.3.1. Хроматографические методы, применяемые на стадии концентрирования
1.3.2. Хроматографические методы, применяемые на стадии тонкой
очистки
2. Экспериментальная часть
2.1. Объекты исследования
2.1.1. Источники получения гналуронидазы
2.1.2. Физико-химические характеристики сорбентов
2.2. Методы исследования
2.2.1. Твердофазное культивирование бактерий Рь.риййа (36)
2.2.2 .Глубинное культивирование бактерий Р§.риййа (36)
2.2.3. Определение бактериальных эндотоксинов по ЛАЛ-тесту

2.2.4. Определение концентрации белка по методу Лоури
2.2.5. Метод определения углеводов
2.2.6. Определение гиалуронидазной активности
2.2.7. Гельхроматографический анализ
2.3. Использование сорбентов в работе
2.3.1. Кислотно-щелочная обработка сорбентов
2.3.2. Исследование сорбции белков в статических условиях (pH -зависимость
и изотермические процессы сорбции)
2.3.3. Исследование кинетики сорбции белков
2.3.4. Проведение процесса сорбции и десорбции в динамических условиях
2.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография
2.5. Капиллярный электорофорез
2.6. Гельэлектрофорез
2.7. Математические методы обработки результатов
3. Результаты и их обсуждение
3.1. Разработка сорбционного метода выделения гиалуронидазы из экстракта молок рыб и нативного раствора Pseudomonas putida (36)
3.1.1. Изучение процесса экстракции гиалуронидазы из молок рыб
3.1.2. Гельхроматографический анализ компонентного состава
экстракта молок осетровых рыб
1.3 3. Подбор штамма - продуцента гиалуронидазы и условий его
культивирования
3.1.4. Гельхроматографический анализ компонентного состава нативного
раствора Pseudomonas putida (36) на различных часах ферментации
3.1.5. Исследование равновесных и кинетических параметров сорбции гиалуронидазы из нативного раствора Pseudomonas putida (36) и экстракта молок рыб
3.1.6. Изучение сорбции гиалуронидазы из экстракта молок рыб в

динамических условиях на сульфакатионите КУ
3.1.7. Изучение процесса сорбции гиалуронидазы из нативного раствора
Pseudomonas putida (36)
3.2. Сравнительный анализ физико-химических и биологических
свойств гиалуронидазы из бактерий Pseudomonas putida (36) и молок осетровых рыб
3.2.1. Изучение pH-оптимума действия и влияния pH на стабильность гиалуронидазы в растворе
3.2.2. Изучение температурного оптимума действия и влияния температуры
на стабильность гиалуронидазы в растворе
3.2.3. Определение кинетических параметров реакции гидролиза гиалуроновой кислоты гиалурокидазой
3.2.4. Изучение кинетических параметров реакции гидролиза гиалуроновой кислоты гиалуронидазой из Pseudomonas putida (36) в присутствии ингибитора
3.3. Изучение гиалуронидазы из молок осетровых и лососевых рыб
современными аналитическими методами
Заключение
Выводы
Список литературы

2) на любой реальной границе зон имеется точка, одинаковая для всех компонентов зоны, которая появляется на выходе из колонки в тот же момент времени, когда при равновесном процессе появилась бы вся абсолютно резкая граница;
3) путем улучшения кинетических условий движения зон (сильное измельчение, однородная упаковка ионита, медленная скорость протекания раствора) можно получить границы с очень малой, хотя и конечной, шириной.
Общий вид выходной кривой идеализированного фронтального процесса представлен на рис. 1.3.1.
п-1 ,п-1 СПП=СП 1 Сп-1л=сп
уСп-2,п-С°_;,

у Объем п фильтрата
рис. 1.3.1. Фронтальный процесс в идеализированной системе Выходная кривая не имеет характерного для класеоновской хроматограммы ступенчатого вида, т.к. при ионном обмене должна соблюдаться электронейтрапьность раствора, вследствие чего суммарная концентрация обменивающихся противоионов всюду должна равняться концентрации коионов С°. Мы принимаем, что границы между зонами идеально резкие, поэтому можно использовать уравнение материального баланса в конечных разностях: уД1ДСу = ДхаДС;у + ДхДпхц, (1)
где V - объемная скорость пропускания раствора через колонку;
ДСу = С; - Сц д - разность между равновесными значениями концентрации 1-го иона в растворе по обе стороны от )-й границы;