Природные каталитические антитела человека и синтетические аналоги активного центра РНКазы А как инструменты исследования структуры РНК

• Автор: Власов, Александр Валентинович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 101 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. РИБОНУКЛЕАЗЫ ЧЕЛОВЕКА (Обзор литературы)
1.1. Введение
1.2. РНК-гидролизующие ферменты
1.2.1. Семейство РНКазы А
1.2.1.1. Субстратная специфичность РНКаз
1.2.1.2. Деполимеризация РНК и расщепление циклофосфатов
1.2.1.3. Биологические функции
1.2.2. РНКазаН
1.2.3. РНКазаЬ
1.2.4. Лактоферрин
1.2.5. РНКаза, специфично гидролизующая двуцепочечные РНК
1.2.6. РНКазаР
1.2.7. РНКаза Т84
1.2.8. РНКаза, специфично гидролизующая поли(А)
1.2.9.1-РНКаза
1.2.10. Каталитические антитела
1.3. Использование РНКаз в диагностике и терапии
1.4. Заключение
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ
2.2. МЕТОДЫ
2.2.1. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови
2.2.2. Электрофоретический анализ белков

2.2.3. Тестирование нуклеазной активности 1§0 в полиакриламидном
геле, содержащем субстрат
2.2.4. Введение [32Р] метки в РНК
2.2.5. Расщепление РНК и ДНК препаратами антител
2.2.5.1. Гидролиз тРНК препаратами и РНКазами
2.2.5.2. Гидролиз ДНК плазмиды рВЯ-322 препаратами 1§0
2.2.5.3. Гидролиз тРНК имидазолом
2.2.5.4. Гидролиз тРНК синтетическими соединениями, моделирующими
активный центр рибонуклеазы А
2.2.6. Фракционирование антител и РНКазы А на фильтрах СепШсоп-ЮО
2.2.7. Определение термосгабильности антител и РНКазы А
3. ПРИРОДНЫЕ КАТАЛИТИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА
И СИНТЕТИЧЕСКИЕ АНАЛОГИ АКТИВНОГО ЦЕНТРА РНКазы А
КАК ИНСТРУМЕНТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ РНК
(Результаты и их обсуждение)
3.1. АНТИТЕЛА ЧЕЛОВЕКА, ОБЛАДАЮЩИЕ
РИБОНУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
3.1.1. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови человека
3.1.2. РНК- и ДНК- гидролизующая активность препаратов антител
3.1.3. Доказательство РНК-гидролизующей активности антител
3.1.3.1. Фракционирование антител и РНКазы А на фильтрах СепПэсоп
3.1.3.2. Термическая денатурация антител
3.1.3.3. Тестирование РНК- гидролизующей активности препаратов иммуноглобулинов после электрофоретического разделения в
полиакриламидном геле, содержащем субстрат
3.1.4. Многообразие рибонуклеазных активностей препаратов антител
3.1.5. Влияние ионной силы, катионов двухвалентных металлов и pH на РНК-гидролизующую активность антител
3.1.6. Структурная специфичность РНК-гидролизующей активности антител

3.2. СИНТЕТИЧЕСКИЕ МОЛЕКУЛЫ, ИМИТИРУЮЩИЕ АКТИВНЫЙ ЦЕНТР РНКазы А, КАК ИНСТРУМЕНТЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ РНК
3.2.1. Имидазол как простейшая модель активного центра РНКазы А
3.2.1.1. Исследование расщепления имидазолом тРНКАяр
3.2.1.2. Исследование расщепления имидазолом тРНКРЬе
3.2.1.3. Исследование расщепления имидазолом тРНКРЬе в комплексе с олигонуклеотидами
3.2.2. Исследование расщепления РНК конъюгатами на основе олиголизина и гистидина
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Химические конструкции: синтетические аналоги активного центра РНКазы были синтезированы Н. С. Ждан, к.х.н. В. Н. Сильниковым и н.с. Д. А. Коневцом (НИБХ СО РАН), как описано в работах [161, 162]. Строение всех полученных конъюгатов было подтверждено методами ЯМР и масс-спектроскопии. Гомогенность полученных соединений контролировали с помощью ТСХ.