Роль NAD-зависимых дегидрогеназ в регуляции гликолиза и сопряженных метаболических путей

• Автор: Языкова, Марина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 232 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Е)-глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа
1.2. Роль глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы в
метаболизме эритроцитов
1.3. Роль недегидрогеназных активностей
глицеральдегид-3-фосфатодегидрогеназы в регуляции клеточного метаболизма
1.4. Нефосфорилирующая дегидрогеназная активность
глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы: индукция перекисью водорода и регуляция тиолами
1.5. Лактатдегидрогеназа
1.6. Фосфорилирование белков и посттрансляционная
модификация МАО - зависимых дегидрогеназ
1.6.1. Фосфорилирование белков без участия протеинкиназ
1.6.2. Протеинкиназное фосфорилирование ферментов
гликолиза
1.7. Ассоциация гликолитических ферментов со
структурными белками
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.2. Основные энзимологические методики
2.3. Определение активности ферментов
2.4. Выделение ферментов
2.5. Иммобилизация белков и ферментов на активированной
бромцианом сефарозе
2.6. Методы, использованные при изучении
автофосфорилирования лактатдегидрогеназы
2.7. Фосфорилирование дегидрогеназ протеинкиназами
2.8. Определение концентрации метаболитов
2.9. Статистические методы исследования и программное
обеспечение
ГЛАВА 3. СОВМЕСТНАЯ ИММОБИЛИЗАЦИЯ
ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ И ДИТИОТРЕИТОЛА
НАСЕФАРОЗЕ
3.1. Получение препаратов иммобилизованной
лактатдегидрогеназы с различным содержанием связанного с матрицей белка
3.2. Иммобилизация лактатдегидрогеназы и
дитиотреитола на сефарозе
ГЛАВА 4. АВТОФОСФОРИЛИРОВАНИЕ NAD-ЗАВИСИМЫХ
ГЛИКОЛИТИЧЕСКИХ ДЕГИДРОГЕНАЗ
4.1. Автофосфорилирование лактатдегидрогеназы
аденозинтрифосфатом
4.2. Автофосфорилирование лактатдегидрогеназы в присуствии
АТР и катионов магния
4.3. Влияние pH, концентрации АТР и катионов магния на
автофосфорилирование лактатдегидрогеназы
4.4. Характеристика связи, образующейся при фосфорилировании
Лактатдегидрогеназы
4.5. Участие лактатдегидрогеназы в ATP-фазной и
трансферазной реакциях

4.6. Механизм автофосфорилирования лактатдегидрогеназы
ГЛАВА 5. ПРОТЕИНКИНАЗНОЕ ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ NAD-
ЗАВИСИМЫХ ГЛИКОЛИТИЧЕСКИХ ДЕГИДРОГЕНАЗ
5.1. Фосфорилирование лактатдегидрогеназы тирозиновыми
протеинкиназами
5.2. Фосфорилирование лактатдегидрогеназы Са27калмодулин-
зависимой протеинкиназой
ГЛАВА 6. АССОЦИАЦИАЦИЯ ТРОПОНИНА ИЗ СКЕЛЕТНЫХ
МЫШЦ КРОЛИКА С ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗОЙ
6.1. Влияние ионов Са2+ на взаимодействие тропонина с
лактатдегидрогеназой
6.2. pH-зависимость ассоциации тропонина с
лактатдегидрогеназой
6.3. Взаимодействие лактатдегидрогеназы стропониномв
процессе осуществления каталитическго акта
6.4. Влияние фосфорилирования лактатдегидрогеназы на ее
ассоциацию с тропонином
ГЛАВА 7. ВЛИЯНИЕ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА НА
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ГЛИКОЛИЗА И НА НАКОПЛЕНИЕ 2
ДИФОСФОГЛИЦЕРАТА
ГЛАВА 8. PH-ЗАВИСИМОЕ ИЗМЕНЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ 2,3-ДИФОСФОГЛИЦЕРАТА, 1,3-ДИФОСФОГЛИЦЕРАТА И 3-ФОСФОГЛИЦЕРАТА В ЭРИТРОЦИТАХ
ГЛАВА 9. ВЛИЯНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ ФУРОКСАНОВОГО РЯДА НА АКТИВНОСТЬ ГЛИКОЛИТИЧЕСКИХ ДЕГИДРОГЕНАЗ И МЕТАБОЛИЗМ ЭРИТРОЦИТОВ

1,3-дифосфоглицерата с 3-фосфоглицераткиназой. Это привело авторов к заключению, что стадия ассоциации двух ферментов необходима для осуществления прямой передачи 1,3-дифосфоглицерата между их активными центрами [Weber et al., 1982]. Однако, оставалось неясным, возможно ли образование достаточно стабильного комплекса между глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой и 3-фосфоглицераткиназой или же распад комплекса является столь же необходимой стадией реакции, как и его образование.
Ашмариной и другими были получены данные об образовании биферментных комплексов 3-фосфоглицераткиназы с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой из различных источников с помощью метода иммобилизации одного из ферментов на нерастворимом носителе [Ashmarina et al., 1984; Sukhodolets et al., 1988; Khoroshilova et al., 1992; Ашмарина и др., 1994]. Преимущество такого подхода заключается в создании условий, сходных с таковыми при адсорбции фермента на клеточной мембране. Опыты проводились как с ферментами, выделенными из одного источника (эритроциты человека, мышцы кролика, пекарские дрожжи и Е. coli), так и из различных. Из этих данных следует, что прочность биферментных комплексов несколько отличается у ферментов, выделенных из разных источников, причем у ферментов из микроорганизмов она выше.
Образование биферментных комплексов 3-фосфоглицераткиназы с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой было подтверждено также кинетическими методами [Khoroshilova et al., 1988] и продемонстрировано с помощью электронной микроскопии [Sukhodolets et al., 1988].
К сожалению, данные о существовании комплексов 2,3-дифосфоглицератмутазы с другими ферментами гликолиза отсутствуют. Имеются немногочисленные публикации о том, что мышечная 3-фосфоглицератмутаза, очень сходная по своим свойствам с 2,3-дифосфоглицератмутазой эритроцитов, взаимодействует с некоторыми гликолитическими ферментами. Так, группой Назаряна был получен