Особенности организации и ферментативной регуляции глюконеогенеза в печени крыс при пищевой депривации и экспериментальном диабете

• Автор: Зузу Мохаммад Саид Халед
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 145 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Особенности протекания биохимических процессов при
экспериментальном диабете
1Л . 1. Сахарный диабет - болезнь обмена углеводов
1Л .2. Биохимические аспекты патогенеза сахарного диабета
1Л.З. Биохимические аспекты аллоксанового диабета
1.2. Трансформация основных запасающих веществ в животном
организме
1.2.1. Катаболизм белков в тканях животных
1.2.2. Синтез и расщепление жирных кислот
1.2.3. Метаболизм углеводов
1.2.4. Трансформация липидов в гликоген в клетках высших животных и человека
1.3. Особенности глюконеогенетических процессов у животных
1.3.1. Ультраструктурные изменения клеток животных при диабете и
голодании
1.3 Л .1. Взаимосвязь липидных включений с микротельцами,
лизосомами и гликогеновыми отложениями
1.3.1.2. Роль аминотрансфераз в глюконеогенезе
1.3.2. Трансформация липидов в гликоген в клетках высших животных и человека
1.4. Глиоксилатный цикл как промежуточный этап глюконеогенеза
1.4.1. Распространение и локализация глиоксилатного цикла
1.4.2. Распространение глиоксилатного цикла у высших растений
1.4.3. Глиоксилатный цикл в тканях животных
1.4.4. Микротельца и их метаболическая функция
1.4.5. Роль микротелец в трансформации липидов в гликоген
1.4.6. Экспрессия и регуляция работы глиоксилатного цикла
Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Цель и задачи
2.2. Объекты и методы исследования
2.2.1. Объекты исследования
2.2.2. Методы исследования
2.2.2.1. Создание условий пищевой депривации и экспериментального диабета
2.2.2.2. Получение материалов различных тканей
2.2.2.3. Дифференциальное центрифугирование
2.2.2.4. Определение активности ферментов
2.2.2.5. Выделение и очистка ферментов
2.2.2.6. Экстракция
2.2.2.7. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония
2.2.2.8. Гель-фильтрация
2.22.9. Ионообменная хроматография
2.2.2.10. Исследование кинетических характеристик и регуляции активности ферментов
2.2.2.11. Аналитический электрофорез
2.2.2.12. Выделение РНК и проведение ПЦР
2.2.2.13. Контроль за индукцией диабета
2.2.2.14. Определение количества белка
2.2.2.15. Статистическая обработка данных
2.3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
2.3.1. Влияние индуцированного диабета на глюконеогенетические процессы

2.3.2. Динамика активности ферментов углеводного метаболизма
2.3.3. Изменение активности АлАТ и АсАТ у крыс с диабетом
2.3.4. Активность ферментов катаболизма
2.3.5. Очистка изоцитратлиазы из печени крыс и изучение ее свойств
2.3.6. Физико-химические и регуляторные характеристики
2.3.7. Очистка и регуляторные свойства малатсинтазы
2.3.8. Регуляторные свойства малатсинтазы
2.3.9. Влияние метаболитов на активность малатсинтазы
2.4. Разработка праймеров и проведение ПЦР для идентификации
гена изоцитратлиазы в геноме животных
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

малатдегидрогеназа окисляет малат до оксалоацетата, восстанавливая НАД+. Цитратсинтаза катализирует образование цитрата из оксалацетата и еще одной молекулы ацетил-СоА. Аконитатгидратаза превращает цитрат в изоцитрат через цис-аконитат. Последним этапом глиоксилатного цикла является образование сукцината и регенерация глиоксилата в изоцитратлиазной реакции (Kornberg, Krebs, 1957).
Глюконеогенез, как правило, реализуется при кооперации ферментов, обычно вовлеченных в функционирование различных метаболических путей: липаз, ферментов ß-окисления жирных кислот, ферментов глиоксилатного цикла, ЦТК и глюконеогенеза. Липазы обнаружены в олеосомах (Moreau, Huang, 1977) и глиоксисомах (Muto, Beevers, 1974), ß-окисление и глиоксилатный цикл протекают в глиоксисомах (Cooper, Beevers, 1969), окисление сукцината в оксалоацетат (или малат) в митохондриях (Nishimura, Beevers, 1979), конверсия оксалоацетата (малата) в сахарозу - в цитозоле.
1.4.1. Распространение и локализация глиоксилатного цикла
Глиоксилатный цикл впервые был обнаружен в бактериях. При изучении бактерий, способных расти на ацетате (или этаноле, который метаболизируется в ацетат) в качестве единственного источника углерода, обнаружилось, что в них присутствует фермент, расщепляющий изоцитрат до глиоксилата и сукцината (Campbell et al., 1953), названный впоследствии изоцитратлиазой, и фермент, конденсирующий глиоксилат с ацетил-СоА с образованием малата (Wong, Ajls, 1955), названный малатсинтазой. Исследование Корнбергом этих реакций у Pseudomonas sp. и Escherichia coli