Свойства и механизм действия АКТГ-подобных пептидов иммунокортина и лейкокортикотропина

• Автор: Ванина, Вера Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 112 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Влияние интерлейкина-1 на ось гипоталамус-гипофиз-надпочечники
1. Концепция двунаправленного взаимодействия между иммунной и эндокринной системами
2. Ось гипоталамус-гипофиз-надпочечники
2 Л. Организация оси ГГН
2.2 Экспериментальная оценка секреторной активности оси ГГН
3. Цитокины
3.1. Цитокины и семейство цитокиновых рецепторов
3.2. IL-1, IL-6 и TNF-a
4. Влияние цитокинов на секреторную активность ГГН оси in vivo
4.1. Исследования на животных
4.2. Исследования на человеке
5. Механизмы активации оси ГГН интерлейкином
5.1. Непосредственные воздействия на гипофиз и надпочечники
5.2. Проникновение цитокинов в мозг
5.2.1. Цитокины и целостность гематоэнцефалического барьера
5.2.2 Опосредованный переносчиками перенос цитокинов через гематоэнцефалический барьер
6. Синтез цитокинов в мозге
Заключение
Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 1. Материалы и методы
1. Реактивы
2. Экспериментальные животные
3. Синтетические пептиды
4. Методы выделения и оценки влияния пептидов на бласт-трансформацию Т- и В- лимфоцитов селезёнки крысы
4.1. Клеточные культуры
4.2. Оценка влияния пептидов на бласт-трансформацию Т- и В-лимфоцитов по включению [метил-3Н]тимидина в клетки
5. Методы изучения стресс - протекторного действия пептидов
5.1. Определение уровня 11-оксикортикостероидов в крови и надпочечниках крыс
5.2. Определение уровня свободного гистамина в сердечной мышце
5.3. Определение активности фермента диаминоксидазы в сердечной мышце
6. Определение кинетических характеристик взаимодействия изучаемых пептидов с рецепторами методом радиолигандного анализа
6.1. Получение мембранных фракций из органов крысы
6.2. Получение [3Н]иммунокортина и [3Н]лейкокортикотропина
6.3. Иодирование пептида АКТГ(11-24)
4 6.4. Изучение связывания 12з1-меченого АКТГ(11-24), [3Н]иммунокортина
и [3Н]лейкокортикотропина с мембранными фракциями из надпочечников крысы
6.5. Анализ ингибирования связывания 12э1-меченого АКТГ(11-24), [3Н]иммунокортина и [3Н]лейкокортикотропина с мембранными фракциями из надпочечников крысы
6.6. Изучение влияния пептидов на активность аденилатциклазы в мембранах коры надпочечников крысы
7. Статистическая обработка результатов
Глава 2. Результаты исследований
1. Характеристика пептидов
2. Влияние пептидов на бласт-трансформацию Т- и В- лимфоцитов селезёнки крысы

2.1. Влияние пептидов на пролиферацию митоген-стимулированных Т- и В- лимфоцитов селезёнки крысы in vitro
2.2. Влияние АКТГ(11-24) и лейкокортикотропина на стимулирующий эффект иммунокортина
2.3. Влияние иммунокортина на спленоциты, находящиеся на разной стадии активации
3. Изучение рецепции пептидов
3.1. Связывание [3Н]иммунокортина с мембранами коры надпочечников крысы
3.2. Связывание [ Н]лейкокортикотропина с мембранами коры надпочечников крысы
3.3. Связывание 12;>1-меченого АКТГ (11-24) с мембранами коры надпочечников крысы
4. Влияние кортикотропинподобных пептидов на функциональную активность коры надпочечников крысы
4.1. Влияние иммунокортина на аденилатциклазную активность мембран коры надпочечников крысы
4.2. Влияние лейкокортикотропина на аденилатциклазную активность мембран коры надпочечников крысы
4.3. Влияние кортикотропинподобных пептидов на уровень 11-оксикортикостероидов (КС) в надпочечниках крысы in vivo
4.3.1. Влияние иммунокортина на уровень КС в надпочечниках крыс в покое, при холодовом и тепловом воздействиях in vivo
4.3.2. Влияние лейкокортикотропина на уровень КС в надпочечниках крыс в покое, при холодовом и тепловом воздействиях in vivo
4.3.3. Влияние лейкокортикотропина на уровень КС в плазме крови
крыс в покое и при холодовом воздействии in vivo
4.3.2. Влияние фрагмента АКТГ(15-18) и его модифицированных аналогов на уровень КС в надпочечниках крыс в покое и при холодовом воздействии in vivo
[Иммунокортин], !VI
Рис. 3. Влияние иммунокортина на пролиферацию лимфоцитов селезенки крысы, стимулированных ЛПС Salmonella typhi. Приведены средние значения ± SEM трех независимых экспериментов.
Действие этого пептида дозозависимо, и максимальный эффект наблюдался в дозе 10”6 М. Иммунокортин увеличивал пролиферацию В клеток в диапазоне концентраций 5x10'3 и 10‘3 М. Действие пептида в концентрации более, чем 10° М, не изучали, т.к. такая концентрация не является физиологической.
2.2. Влияние АКТГ(11-24) и лейкокортикотропина на стимулирующий
эффект иммунокортина С тех пор как стало известно, что АКТГ(11-24) и лейкокортикотропин связываются с рецептором АКТГ, обнаруженном на тимоцитах и макрофагах мыши (Zav'yalov et al., 1995; Navolotskaya et al., 2000), было изучено влияние этих пептидов на стимулирующий эффект иммунокортина. Исследования показали, что инкубация спленоцитов как с АКТЦ11-24), так и с лейкокортикотропином в течение часа до добавления иммунокортина и митогена в среду вызывало подавление способности иммунокортина стимулировать пролиферацию Т клеток (Рис. 4)