Роль различных путей образования свободных радикалов в токсическом действии глутамата при ишемии переднего мозга крыс

• Автор: Молчанова, Светлана Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 154 с. : ил.

ь СОДЕРЖАНИЕ
• СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ЕЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Биохимические механизмы поражения нервных клеток при
ИШЕМИИ
1.1.1 Этап инициации
1.1.2 Этап экспрессии
ф 1.1.2 Этап терминации
1.2 Различия в чувствительности нейронов разных областей мозга к
% ИШЕМИЧЕСКОМУ ВОЗДЕЙСТВИЮ
1.2.1 Области мозга, особо чувствительные к ишемии
1.2.2 Причины селективной гибели клеток
1.3 Токсическое действие глутамата при ишемии
1.3.1 Пути выброса глутамата при ишемии
1.3.2 Типы глутаматныхрецепторов
1.3.3 Эксайтотоксичность при ишемии и нейродегеиеративных заболеваниях
Ф 1.4 Образование свободных радикалов при ишемии
1.4.1 Типы свободных радикалов
1.4.2 Пути образования свободных радикалов при ишемии
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Модели токсического действия глутамата при ишемии
2.1.1 Модель воздействия глутамата на нервные окончания мозга
2.1.2 Модель глобальной ишемии переднего мозга in vivo
2.1.3 Микродиализ при глобальной ишемии переднего мозга in vivo
^ 2.2 ПОКАЗАТЕЛИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ТКАНИ МОЗГА

* 2.2.1 Определение внутриклеточной концентрации ионов кальция...,
2.2.2 Определение активности Ма+,К7~-АТФазы
• 2.2.3 Определение содержания малонового диальдегида
2.2.4 Определение входа 45Са2+ в синаптосомы
2.2.5 Определение содерэ/сания диеновых конъюгатов
2.2.6 Определение концентрации нейромедиаторных аминокислот.,
2.2.7 Определение содержания белка
2.2.8 Определение содержания фосфора неорганического
2.3 Анализ данных и статистическая обработка результатов
2.3.1 Анализ данных, полученных in vitro
% 2.3.2 Анализ данных, полученных in vivo
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ * 3.1 РОЛЬ РАЗЛИЧНЫХ ПУТЕЙ ОБРАЗОВАНИЯ СВОБОДНЫХ РАДИКАЛОВ В
ТОКСИЧЕСКОМ ДЕЙСТВИИ ГЛУТАМАТА IN VITRO
3.1.1 Действие глутамата и ингибиторов реакций образования свободных радикалов на показатели метаболизма в синаптосомах коры больших полушарий
3.1.2 Действие глутамата и ингибиторов реакций образования свободных радикалов на показатели метаболизма в синаптосомах стриатума
ф 3.1.3 Действие глутамата и ингибиторов реакций образования
свободных радикалов на показатели метаболизма в синаптосомах
гиппокампа
3.2 РОЛЬ ФОСФОЛИПАЗНОГО ПУТИ ОБРАЗОВАНИЯ СВОБОДНЫХ РАДИКАЛОВ В
ТОКСИЧЕСКОМ ДЕЙСТВИИ ГЛУТАМАТА IN VIVO
3.2.1 Действие ишемии и реперфузии на внеклеточную концентрацию нейромедиатор!ibix аминокислот, активность Na+,KT-АТФазы и накопление диеновых конъюгатов

£ 3.2.2 Действие ингибиторов фосфолипазы А2 и циклооксигеназы на
активность Na+,lC-АТФазы и накопление диеновых конъюгатов
Ф при глобальной церебральной ишемии
ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 РОЛЬ РАЗЛИЧНЫХ ПУТЕЙ ОБРАЗОВАНИЯ СВОБОДНЫХ РАДИКАЛОВ В ТОКСИЧЕСКОМ ДЕЙСТВИИ ГЛУТАМ АТА IN VITRO
4.1.1 Участие свободных радикалов в токсическом действии
глутамата
4.1.2 Роль NO-сиптазного пути образования свободных радикалов
4.1.3 Роль фосфолипазного пути образования свободных
* радикалов
4.1.4 Роль ксантиноксидазного пути образования свободных
* радикалов
4.1.5 Роль митохондриального пути образования свободных
радикалов
4.2 РОЛЬ ФОСФОЛИПАЗІЮГО ПУТИ ОБРАЗОВАНИЯ СВОБОДНЫХ РДИКАЛОВ В ТОКСИЧЕСКОМ ДЕЙСТВИИ ГЛУТАМАТА IN VIVO
4.2.1 Общая характеристика модели глобальной церебральной ишемии и реперфузии
4.2.2 Роль фосфолипазного пути образования свободных радикалов в
Ф окислительном ингибировании Na+,K¥-АТФазы и накоплении
диеновых конъюгатов при ишемии и реперфузии
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 2 Материалы и методы исследования
2.1 Модели токсического действия глутамата при ишемии
2.1.1. Модель воздействия глутамата на нервные окончания мозга
При изучении токсического действия глутамата in vitro использовали фракцию нервных окончаний - синаптосом, выделенных методом дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы по методу Хайоша с модификациями (Hajos, 1975), и фракцию неочищенных митохондрий (Р2 фракция). После инкубации выделенных фракций с глутаматом оценивались следующие параметры: [Са2+],-, вход 45Са2+,
активность Na+, К+-АТФазы и содержание МДА.
Выделение субклеточных фракций ткани мозга крыс. В экспериментах использовали самцов крыс линии Wistar (250-270 г). Животных убивали декапитацией. Неокортекс, стриатум и гиппокамп выделяли согласно атласу (Fifkova, Marsall, 1967). Ткань исследуемых областей мозга очищали от сосудов и гомогенизировали в 10 объемах 0,32 М сахарозы на 40 мМ трис-НС1 (pH 7,4). Все процедуры проводили при 4°С. Полученный гомогенат центрифугировали 10 минут при 1500 g. Осадок суспендировали в исходном растворе и вновь центрифугировали в том же режиме. Объединенный супернатант центрифугировали 20 минут при 20000 g. Полученный осадок, представляющий собой Р2 фракцию, использовали в ряде экспериментов по определению содержания МДА.
Для выделения очищенных синаптосом Р2 фракцию наносили на градиент плотности сахарозы (1,2 М, 0,8 М и 0,32 М сахароза на 40 мМ трис-НС1) и центрифугировали при 20000 g в течение часа. Фракцию синаптосом, образовавшуюся на границе 0,8 и 1,2 М растворов сахарозы, отбирали пастеровской пипеткой и дважды промывали 40 мМ трис-НС1 (pH 7,4), центрифугируя каждый раз по 10 минут при 20000 g (Hajos, 1975). Препарат синаптосом использовали в экспериментах по определению [Ca2+]j, входа 45Са2+