Индуцибельность ферментов биотрансформации ксенобиотиков в печени мышей, различающихся по чувствительности к гепатоканцерогенному действию орто-аминоазотолуола

• Автор: Захарова, Людмила Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 88 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Множественные формы цитохрома Р0

1.2 Характеристика цитохромов Р0 подсемейства 1А

1.2.1. Индукция цитохрома РА1

1.2.2Конститутивная экспрессия и индукция цитохрома РА2

1.2.2. Субстратная специфичность цитохромов РА.

1.3 Ферменты конъюгации в биотрансформации ксенобиотиков

1.3.1 Уридиндифосфояиокуронидтранаеразы

1.3.2 ГлутатиопБтрансферазы
1.3.3 1Чацетилтранеферазы
1.1.4 Сулыротрансферазы
1.5 Метаболическая активация канцерогенных ароматических аминов.м.
1.6 Заключение.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Материалы.
2.1 Животные. Обработка индукторами.
2.2 Методы
2.2.1 Выделение микросом.
2.2.2 Определение белка
2.2.3 Определение количества цитохромов Р0 и Ь5
2 Одесиоптирование алкоксщэезоруфипов .
2.3.5 Определение каталитической активности глутатионБ
трансераз.
2.3.6 Определение каталитической активности УГГ
2.3.7 Определен ие метаболитов парацетамола.
3.i Белковый иммунобпоттинг.
А 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
СОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
О АТ 0ам иноазо толуол
ПАУ поли циклические ароматические углеводороды
рецептор арилгидрокарболовый рецептор
X 3мети л хол ан ре н
ТХДЦ тстрахлордифснилдиоксан
Ы1 бензапирен
БПДЕ бензалирен 7.8диол9,оксид ЭР 7этоксирезоруфин МР 7метоксирезоруфип А А ацетаминофен, парацетамол восстановленный глутатнон глутатнонБтрансфераза УДФ уридинд и фосфат
УДТ уридиндифосфоглюкуронозилтрансферазы
ариламин ацстилтрансфераза
ЭПР эндоплазматический ретикулум
ПЦР полимеразная цепная реакция
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
ДНХН 1хлор2,4дииитробензол
3фосфоаденозин5фосфосульфаг
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Для исследования процессов химического канцерогенеза в качестве модели часто используют инбредные линии мышей. Этому способствует ряд обстоятельств. Известно, что для окислительного метаболизма ксенобиотиков характерны генетические вариации, как в популяции людей, так и в популяции грызунов. Например, вариации ответа на ноли циклические ароматические углеводороды ПАУ среди инбредных линий мышей связаны с полиморфизмом рецептора i, , причем этот ответ влияет на индуцибельность ферментов как 1й, так и 2й фазы метаболизма ксенобиотиков i, i, . Инбредные линии мышей отличаются по индуцибелъности цитохромов Р0 подсемейства 1А. Этим ферментам принадлежит важная роль на стадии инициации химического канцерогенеза, поскольку они осуществляют биоактивацию большого количества загрязнителей окружающей среды типа ПАУ преимущественно Р0 1А1, ароматических аминов преимущественно Р0 1А2 и ряда других канцерогенных соединений , i, . Показано также, что инбредные линии отличаются по чувствительности к химическому канцерогенезу. Упомянутые факторы обеспечиваю Одним из больших классов химических канцерогенов являются аминоазобензолы, применяемые в качестве красителей в промышленности. Эти соединения характеризуются выраженной видовой и органной специфичностью i. Ранее сотрудниками Института цитологии и генетики СО РАН Калединым В. И. и др. Каледин В. И., была выявлена различная чувствительность инбредных линий мышей к гепатоканцерогенезу, индуцируемому одним из азобензолов оаминоазотолуолом ОАТ. Известно, что канцерогенный эффект оказывают не сами азосоединения, а их метаболиты , , причем наряду с реакциями активации в организме протекают и реакции детоксикации, направленные на обезвреживание высокотоксичных промежуточных соединений. В рамках подобной гипотезы можно предполагать, что чувствительность или резистентность линии к индукции опухолей ОАТ на инициирующей стадии канцерогенеза определяется на уровне его метаболизма, протекающего неодинаково у мышей различных линий. Тогда количество образующегося реактивного метаболита ОЛТ будет неодинаково у разных линий, при этом одним из факторов определяющих развитии канцерогенного процесса является баланс между активностями ферментов активации и детоксикации. Частота и длительность введения канцерогена также могут влиять на индуцибельность ферментов биотрансформации. Таким образом, важно провести оценку активности и индуцибельности ферментов как на инициирующей стадии, гак и на более поздних стадиях канцерог енеза. На основании вышеизложенного, были сформулированы цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является исследование индуиибелыгосги ферментов биотрансформации ксенобиотиков в печени мышей инбредных линий па инициирующих и более поздних этапах канцерогенеза, вызываемого оаминоазотолуолом. Р0 1А индуцирует оаминоазотолуод. Изучить активность основных конъюгирующих ферментов 2й фазы гяутатион8трансферазы и уридиндифосфоглюкуронозил грансферачы в печени мышей, индуцированных оаминоазотолуолом. Оценить активность конъюгирующих ферментов 2й фазы i viv с использованием тестового субстрата ацетаминофена. Научная новизна работы. Впервые исследовано индуцирующее действие оаминоазотолуола на цитохромы Р0 печени мышей. Охарактеризована активность ферментов 2й фазы глутатион8трансферазы и уридиндифосфоглюкуронозил грансферазы у четырех инбредных линий мышей. Охарактеризовано влияние долговременного многократного введения оаминоазотолуола на индукцию цитохромов Р0 1А и глутатион8трансферазы. Исследование основных ферментов биотрансформации ксенобиотиков, участвующих в метаболизме оаминоазотолуола у мышей инбредных линий, позволило сделать ряд заключений о взаимосвязи между чувствительностью или резистентностью отдельных линий к индуцируемому оаминоазотолуолом гепатоканцерогенезу и активностью ферментов 1 й и 2й фазы. Полученные результаты являются новой информацией о ферментах метаболизма ксенобиотиков в печени инбредных линий мышей, подвергавшихся воздействию генатоканцерогена оаминоазотолуола.