Роль глутаматных рецепторов и Na/K-насоса в регуляции окислительного стресса

• Автор: Казей, Василий Игоревич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
РАЗДЕЛ I. РОЛЬ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА В АДАПТАЦИИ К ОКИСЛИТЕЛЬНОМУ СТРЕССУ
1.1. СИГНАЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ СВОБОДНЫХ РАДИКАЛОВ В
ВОЗБУДИМЫХ ТКАНЯХ
1.11. ГЛУТАМАТНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ И РЕГУЛЯЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В МОЗГЕ
I.ІІІ. МИШЕНИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В ЖИВОЙ КЛЕТКЕ
РАЗДЕЛ П. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
II. I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
11.1.1. Животные
11.1.2. Протокол введения исследуемых соединений
11.1.3. Физиологические методы исследования
11.1.4. Выделение нейронов из мозжечка мышей и крыс
11.1.5. Определение концентрации белка
11.1.6. Определение ферментативных активностей
11.1.7. Определение концентрации биогенных аминов
11.1.8. Определение окисленности белков
II. 1.9. Хемилюминесцентный анализ АФК
11.1.10. Измерение уровня Fe2' -индуцированной хемилюминесценции

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
Сокращения, принятые в тексте диссертации для обозначения радикальных продуктов и химических групп, соответствуют рекомендации Комиссии по биохимической номенклатуре IUPAC.
Другие сокращения, используемые в диссертации:
ACPD - 1-аминоциклопентан-1,3-дикарбоновая кислота
АМРА - а-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изооксазолпропионовая кислота
DHPG - 3,4-дигидроксифенилгликоль
DNP - динитрофенилгидразин
dNTP - смесь дезоксинуклеотидов АТФ, ГТФ, ЦТФ, ТТФ.
GAPDH - глицеральдегид-3 фосфат дегидрогеназа
GPCR - G-protein coupled receptors, рецепторы сопряженные с Gбелками
mGluI (11,111) - глутаматные рецепторы 1,11,111 групп соответственно M-MLV-RT - обратная транскриптаза вируса саркомы Молони грызунов.
МРТР - 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин NMDA - Ы-метил-D-acnapTaT OD - оптическая плотность
SAM(P/R) - Senescence Accelerated Mice (Prone/Resistant), линия мышей с ускоренным старением (склонные/устойчивые)
АТФ - аденозинтрифосфорная кислота АФК - активные формы кислорода ДОБА - диоксибензиламин
кДНК - кодирующая дезоксирибонуклеиновая кислота МАО А, В - моноаминооксидаза А, В соответственно МДА - малоновый диальдегид

Эппендорфа и наносили на нее 40 мкл свободной от РНКаз воды. После этого колонку подвергали центрифугированию при 9400 £ в течении 1 мин. Колонка отбрасывалась, а в образовавшемся фильтрате определяли концентрацию РНК.
Определение концентрации РНК
Концентрацию выделенной РНК определяли на спектрофотометре Вюгас1 8таН8рес1М3000 при длине волны 260 нм. Принимали, что концентрации РНК равна 40 мкг/мл при 00=1.
Обратная транскрипция
Реакцию обратной транскрипции проводили с помощью набора РЯОМЕвА М-МЬУ ЯТ. Для реакции использовали 1 мг мРНК, доведенный до объема 15.1 мкл свободной от РНКаз водой. После этого добавляли 1 мкг олиго(бТ) праймеров (2 мкл) и инкубировали смесь 5 мин при 70°С. Для проведения реакции использовали реакционную смесь, представленную в Таблице 5. Конечный объем реакционной смеси составлял 8,05 мкл на пробу.
Таблица 5. Состав реакционной смеси для проведения реакции обратной транскрипции
Компонент реакции Объем
5хМая1ег Ьи1Тег 5 мкл
аитр 10 шМ (1,2 мкл)
ЯКАбш 3414 (0,85 мкл)
М-МЬУ-ЯТ 200 У (1 мкл)