Исследование ранних и отставленных последствий препарационного повреждения в срезах гиппокампа in vitro

• Автор: Пахотина, Ирина Дмитриевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 140 с.

Список сокращений
Введение
Глава 1. Литературный обзор
1.1. Срезы мозга in vitro как естественная модель острых и отставленных реакций повреждения
1.1.1. Срезы мозга как объект для нейробиологических исследований
1.1.2. Восстановительный период
1.1.2.1. Краткий обзор метаболического профиля восстановительного периода
1.1.2.2. Электрофизиологические и морфологические характеристики восстановительного периода
1.1.3. Препарационное повреждение
1.1.4. Последствия препарационного повреждения (отставленные реакции повреждения)
1.1.5. Срезы - адекватная модель острой травмы мозга
1.2. Анализ возможных подходов к блокаде последствий препарационного повреждения
1.2.1. Существующие методы коррекции состояния срезов
1.2.2. Оценка принципиальной возможности коррекции некоторых ключевых стадий посттравматических процессов на модели срезов
1.2.3. Гипотермическое хранение как способ длительного поддержания жизнеспособности срезов in vitro
1.2.3.1. Возможность гипотермического хранения срезов мозга теплокровных животных in vitro
1.2.3.2. Протективное и деструктивное действие гипотермии
Глава 2. Основные методы
2.1. Экспериментальные животные и обьекты исследования
2.1.1. Срезы гиппокампа морских свинок
2.1.2. Срезы продолговатого мозга золотой рыбки
2.2. Инкубация in vitro препаратов и модельные условия для электрофизиологинеского тестирования
2.2.1. Инкубация
2.2.2. Схема нанесения и исследование действия веществ

2.2.3. Моделирование условий ишемии
2.2.4. Исследование длительности инкубирования срезов в некарбогенизированной среде
2.2.5. Гипотермическое хранение
2.3. Электрофизиологическая регистрация
Результаты экспериментов
Глава 3. Оценка нейропротективного потенциала ингибиторов каскадов АК и окиси азота
3.1. Скорость постпрепарационного восстановления срезов гиппокампа
3.2. Устойчивость к гипотермии срезов гиппокампа in vitro
3.3. Основные результаты и заключения
Глава 4. Динамика постпрепарационного восстановления электрической активности
4.1. Динамика постпрепарационного восстановления
4.2. Основные результаты и заключения
Глава 5. Сохранность специфических свойств вызванной нейронной активности в срезах гиппокампа
5.1. Размер и персистенция ответа
5.2. Сохранность пластических свойств
5.2.1. Ответы на парную стимуляцию в срезах гиппокампа
5.2.2. Индукция и поддержание долговременной потенциации
5.3. Основные результаты и заключения
Глава 6. Устойчивость срезов гиппокампа в условиях гипоксии и ишемии
6.1. Популяционная активность в условиях некарбогенизированной среды
6.2. Ишемия в срезах гиппокампа
6.3. Вариации ишемической устойчивости срезов гиппокампа
6.4. Основные результаты и заключения
Глава 7. Толерантность in vitro препаратов мозга к длительной инкубации в
условиях периодической гипотермии
7.1. Восстановление электрической активности в срезах гиппокампа после воздействия гипотермии

7.2. Длительное инкубирование срезов при периодическом хранении в
гипотермии
7.3. Гипотермическая устойчивость срезов продолговатого мозга золотой рыбки
7.4. Основные результаты и заключения
Глава 8. Обсуждение результатов
8.1. Стадия приготовления in vitro препаратов как триггенрная фаза ранних и отставленных нарушений клеточного гомеостаза
8.2. Возможность коррекции последствий препарационого повреждения
8.3. Ранние последствия препарационного повреждения в срезах гиппокампа
8.4. Отставленные последствия препарационого повреждения
8.4.1. Ишемия
8.4.2. Гипотермия
8.5. Адекватность критериев нейропротективности
Выводы
Список литературы

помощью вибратома МНТ-240 и помещали в проточную камеру (скорость протока 4млмин) для инкубации и регистрации электрической активности. Обычно из двух гиппокампов одного животного получали 8-10 срезов стандартного качества и размеров.
2.1.2. Срезы продолговатого мозга золотой рыбки
Мозг рыбок выделяли по разработанной ранее методике (Moslikov et al., 1998). Срез продолговатого мозга, содержащий Маутнеровские нейроны, толщиной 700-900 мкм, готовили с помощью вибратома МНТ-240 и помещали в проточную камеру для инкубации и регистрации электрической активности.
2.2. Инкубация in vitro препаратов и условия тестирования
2.2.1. Инкубация
Инкубация срезов гиппокампа морских свинок осуществлялась в насыщенной карбогеном среде Рингера-Кребса (в мМ): NaCl 124, КС1 5, КН2Р04 1.25, MgS04 1.3, СаС12 2.4, NaITC03 26, С6Н,206 10. Температура среды инкубации составляла 31-32С, pH 7.4. Инкубация срезов продолговатого мозга рыбки производилась в среде следующего состава (в мМ): NaCl 76, КС1 0.4, КН2Р04 1.2, MgS04 2.6, СаС12 4.0, NaHC03 12.5, С6Н1206 2.0. Среда для выделения мозга и приготовления срезов включала те же компоненты, что и среда для суперфузии и гемин (ЮмкМ). Температура среды инкубации составляла 15-20С, pH 7.5.
2.2.2. Схема нанесения и исследование действия веществ
С целью выявления значения препарационного периода на длительность дальнейшего инкубирования нами была разработана (Pakhotin et al., 1997) схема нанесения веществ в растворе Рингера-Кребса кратко (3-4 минуты), во время приготовления срезов (Рис.1). В части экспериментов ингибитор присутствовал в растворе в течение всего времени эксперимента.
2.2.3. Моделирование условий ишемии
Ишемия вызывалась заменой стандартного раствора Рингера-Кребса при суперфузии срезов в инкубационной камере раствором Рингера-Кребса,