Сверхспиральная ДНК человека и животных при экстремальных воздействиях

• Автор: Ващенко, Владимир Иванович
• Шифр специальности: 14.00.46, 03.00.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 243 с. : ил.

Глава 1. Методы исследования субпопуляций лимфоидных клеток

. Изучение фагоцитоза и метаболической стимуляции гранулоцитов крови и костного мозга. Глава 2. Современные методы изучения сверхспиральной ДНК эукариот
наложением зажима на контралатеральный главный бронх. Во избежание значительной примеси крови в смывах животных предварительно обескровливали путем перерезки брюшной аорты. При этом проводился визуальный осмотр органов брюшной полости и грудной клетки. Бронхоальвеолярные макрофаги получали путем шестикратного промывания бронхов 0,2 раствором версена НИИ вирусных препаратов, Москва при комнатной температуре РаадПагс Е. Я., . При этом клетки пребывали в растворе версена не более минут. Затем их осаждали в центрифужных пробирках при обмин на лабораторной центрифуге ОПН3 в течение 8 минут, ресуспендировали в инкубационной среде 9 и хранили при пониженной температуре 4С во избежание агрегации до момента посева на чашки. Подсчет клеток из бронхиальных смывов проводили в камере Горяева на микроскопе МБИ3.


После однократного центрифугирования при 0д в течение минут клетки ресуспендировали в среде 9 без гепарина в объеме мл, фильтровали через слоев медицинской марли
и подсчитывали содержание миелокариоцитов в камере Горяева. Далее клетки костного мозга разбавляли до 1,,0x6 кл. Выделение субпопуляций лейкоцитов человека. Лимфоциты. Получение лимфоцитов из периферической или венозной крови осуществляли по методу Хейфеца и Абалакина Хейфец X. Б. . Абалакин А. В., в градиенте фиколверографина либо в стандартномтном растворе фиколлпака i, Швеция. Гранулоциты, лимфоциты, моноциты. Выделение этих субпопуляций клеток из периферической или венозной крови человека производили по модифицированному методу Бикало i . Для этого использовали многоступенчатый градиент фиколлверографина, который готовили из трех заранее подготовленных растворов А, Б, В . Раствор А состоял из мл раствора верографина, раствор Б из мл 9 фиколла, раствор В из мл ,6 фиколла. Для получения раствора Г мл Б смешивали с мл раствора А. Раствор Д получали смешивая мл раствора В и мл раствора А. Затем в стандартную центрифужную пробирку объемом мл осторожно наливали 2 мл полученного раствора Д а сверху наслаивали 2,5 мл раствора Г. На сформированный таким образом двухступенчатый градиент осторожно наслаивается 5 мл крови разбавленной в два раза забуференным 0,9 раствором хлорида натрия. Центрифугирование производили на центрифуге Т Чехия в горизонтальном роторе в течение минут при 0 и С. Из полученных после осаждения семи слоев использовали фракцию 5 и фракцию 6 после стандартной трехкратной отмывки раствором Хенкса или средой 9. Цитологические методы оценки состояния клеток. Оценка жизнеспособности клеток при помощи витальных красителей.