Молекулярный анализ генов цитохрома Р4502С9 и витамин К-эпоксид редуктазы VKORC1 в лабораторном контроле терапии варфарином

• Автор: Улитина, Анна Сергеевна
• Шифр специальности: 14.00.46
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 140 с. : 11 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ФАРМАКОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ДЕЙСТВИЯ В АРФ АРИНА

(обзор литературы)

1 Л. Механизм действия и фармакокинетика варфарина

1.2. Лабораторные методы контроля действия варфарина, методы клинической оценки эффективности и безопасности препарата
1.3. Генетическая детерминированность эффективности и безопасности терапии варфарином

1.3.1. Влияние аллельных вариантов гена СУР2С9 на чувствительность к варфарину

1.3.2. Распространенность аллельных вариантов гена СУР2С9 в различных популяциях

1.3.3. Влияние аллельных вариантов гена УКСЖС1 на чувствительность к
варфарину
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Клиническая характеристика обследованных лиц
2.2. Лабораторные методы, использованные для оценки действия варфарина
2.3. Специальные методы молекулярно-генетических исследований
2.3.1. Выделение ДНК из периферической крови пациентов
2.3.2. Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ
2.3.3. Определение аллельных вариантов гена цитохрома Р450 2С9
2.3.4. Определение аллельных вариантов гена витамин К-эпоксид редуктазы
УКОЛС1
2.4 Статистическая обработка результатов исследования
Глава 3. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДЕТЕКЦИИ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ ВИТАМИН К-ЭПОКСИД РЕДУКТАЗЫ УКОКС
3.1. Разработка метода выявления мутаций в кодирующей и регуляторной областях гена УКОЛС1
3.2. Поиск новых мутаций в кодирующей области гена УКОКС
Глава 4. ПОПУЛЯЦИОННЫЙ АНАЛИЗ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНА ЦИТОХРОМА Р450 2С9
4.1. Результаты популяционного анализа частоты аллельных вариантов гена СУР2С9 в Северо-Западном регионе Российской Федерации
4.2. Значение аллельных вариантов гена СУР2С9 в профилактике тромбоэмболических осложнений варфарином
4.2.1. Зависимость индивидуальной чувствительности к варфарину от генотипов СУР2С9
4.2.2. Алгоритм дозирования варфарина у пациентов с различной
чувствительностью к препарату
Глава 5. ПОПУЛЯЦИОННЫЙ АНАЛИЗ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНА ВИТАМИН К-ЭПОКСИД РЕДУКТАЗЫ УКОЛС1
5.1. Результаты популяционного анализа частоты мутаций в гене УКОКС 1 в Северо-Западном регионе Российской Федерации
5.2. Значение мутаций в регуляторной области гена УКОКС 1 в профилактике тромбоэмболических осложнений варфарином
5.2.1. Мутация С1173Т в интроне 1 гена УКОЛС1
5.2.2. Мутация О3730А в З'-нетранслируемой области гена УКОЛС1
Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АНД — антикоагулянты непрямого действия ВОЗ — Всемирная Организация Здравоохранения ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ИБС - ишемическая болезнь сердца ИКС — искусственные клапаны сердца МИЧ — международный индекс чувствительности МНО — международное нормализованное отношение ОИМ — острый инфаркт миокарда
ОНМК — острое нарушение мозгового кровообращения
ПААТ - полиакриламидный гель
ПВ — протромбиновое время
п.н. - пара нуклеотидов
ПЦР — полимеразная цепная реакция
тРНК — транспортная рибонуклеиновая кислота
ТЭЛА — тромбоэмболия легочной артерии
ТЭО - тромбоэмболические осложнения
ЭДТА — этилендиаминтетраацетат
Cl — confidence interval — доверительный интервал
CYP2C9 - цитохром 2С9 семейства Р450 и его ген
df- degrees of freedom - число степеней свободы
Km - константа Михаэлиса
п — число обследованных в группе
OR - odds ratio - соотношение шансов
SSCP — single strand conformation polymorphism
конформационный полиморфизм однонитевой ДНК
VKORC1 - витамин К-эпоксид редуктаза и ее ген
Vmax - максимальная скорость ферментативной реакции

Именно в генетически обусловленном изменении структуры данного фермента большинство авторов видит причину состояния варфарин-резистентности (Mushiroda Т. et al., 2006). При этом недавно получены сведения, что у монголоидов чувствительность к варфарину в большей степени зависит от структурных полиморфизмов гена VKORC1, нежели от мутаций в гене CYP2C9. Путем многофакторного анализа было установлено, что вклады генов VKORC1 и CYP2C9 в величину поддерживающей дозы варфарина у 69 обследованных ими китайских пациентов составили 31,0% и 7,9%, соответственно (Veenstra et al., 2005).
Таким образом, в настоящее время большинство исследователей считают, что структурные полиморфизмы генов CYP2C9 и VKORC1 являются независимыми друг от друга важными генетическими детерминантами, влияющими на чувствительность к АНД, в частности, к варфарину (Takahashi
H. et al., 2006). Этими генетически фармакокинетическими (CYP2C9) и фармакодинамическими (VKORC1) факторами в итоге объясняется более 50% различий в индивидуальной чувствительности к варфарину (Bodin L. et al., 2005; Geisen C. et al., 2005). Важно отметить, что различные мутации в гене VKORC1 могут как понижать, так и повышать чувствительность к варфарину (Reitsma Р.Н. et al., 2005).