Природные \Na-интерферон и антибактериальный пептидный комплекс: технология получения, новые лекарственные формы, оценка эффективности

• Автор: Волкова, Лариса Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Пермь
• Количество страниц: 287 с. : 15 ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор данных литературы

Интерфсроны биологические свойства, технологии получения и

аспекты практического использования

1.1. Интерфсроны и их биологические свойства

1.2. Антибактериальные пептиды человека

1.3. Современные аспекты технологии производства интерферона

1.4. Лекарственные формы интерферона

1.4.1. Жидкие лекарственные формы природного интерферона

1.4.2. Мягкие лекарственные формы интерферона
1.4.3. Таблетированные формы интерферона
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1 .Объекты исследования
2.1.1. Рабочая коллекция микроорганизмов
2.1.2. Препараты интерферона
2.1.3. Реактивы и среды
2.1.4. Диагностические препараты
2.1.5. Иммуноферментные тест системы
2.1.6. Экспериментальные модели
2.2. Методы исследования
2.2.1. Методы культивирования вирусов
2.2.2. Культуральные методы
2.2.3. Иммунологические методы
2.2.4. Иммуноферментные методы
2.2.5. Физикохимические методы
2.2.6. Микробиологические методы
2.2.7. Биологические методы
2.2.8. Клинические исследования
2.2.9. Статистические методы
Глава 3. Разработка методологических основ единой эффективной
системы получения природного интерферона
3.1. Подбор оптимальных условий культивирования вируса Сендай
3.2 Оптимизация методов очистки и концентрации вируса Сендай
3.3 Разработка условий реакторного культивирования лейкоцитов, индуцированных вирусом Сендай
3.4. Изучение спектра цитокинов, продуцируемых лейкоцитами
человека под действием вируса Сендай индуктора интерфероногенеза
Глава 4. Совершенствование методов получения препарата
Свеферон и оценка его терапевтической эффективности
4.1. Оценка влияния жировых основ на активность интерферона в 1 суппозиториях
4.2. Совершенствование методики экстрагирования интерферона из 9 липофильных основ мягких лекарственных форм интерферона для
контроля противовирусной активности
4.3. Оценка стабильности интерферона в жировых суппозиторных 1 основах
4.4. Оценка терапевтической эффективности препарата Свеферон 4 при лечении женщин с бактериальным вагинозом
Глава 5. Создание оптимальной композиции мази с интерфероном,
оценка безвредности и клинической эффективности
5.1. Сравнительная оценка различных мазевых композиций и разработка технологии приготовления мази с интерфероном
5.2. Разработка методики определения противовирусной активности интерферона в дифильных мазевых основах
5.3. Изучение стабильности интерферона в дифил ьных основах
5.4. Оценка биологической доступности мази с интерфероном
5.4.1. Сравнительная оценка динамики противовирусной активности интерферона при ректальном и внутривенном путях введения
5.4.2. Изучение фармакокинетики мази с интерфероном при введении интраназально и при нанесении на кожу
5.5. Оценка местнораздражающего действия мазевой лекарственной формы интерферона
5.6. Оценка общетоксического действия мази с интерфероном
5.7. Оценка терапевтической эффективности мази с лейкоцитарным интерфероном при герпетической инфекции
Глава 6. Разработка способа изготовления и оценка лекарственной эффективности сублингвальной таблетированной формы Интерферона
6.1. Поиск оптимального состава и разработка способа получения сублингвальной таблетки интерферона
6.2. Разработка метода определения противовирусной активности интерферона в таблетированной форме
6.3. Оценка стабильности специфической активности интерферона в таблетке в процессе хранения
6.4. Изучение биодосгупности специфической составляющей сублингвальной таблетированной формы интерферона
6.4.1.Сравнительная оценка динамики всасывания интерферона, введенного животным орально в форме таблетки и раствора
6.5. Доклиническая оценка безопасности интерферона в таблетках
6.5.1. Изучение острой токсичности интерферона в таблетках
6.5.2. Изучение хронической токсичности препарата интерферона в таблетках при многократном введении экспериментальным животным
6.6. Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов у кроликов при длительном введении интерферона в таблетках
6.7. Изучение фармакодинамики интерферона у добровольцев после однократного приема сублигвальной таблетки с интерфероном
Глава 7. Выделение и физикохимическая оценка изолированного антибактериального низкомолекулярного пептидного комплекса, продуцируемого лейкоцитами человека, индуцированных вирусом Сендай
7.1. Сравнительная оценка антибактериальной активности препаратов интерферона, выпускаемых в Российской Федерации
7.2. Изучение антибактериальной активности продуктов интерфероногенеза в зависимости от условий синтеза интерферона
7.3. Определение динамики синтеза антибактериального фактора, продуцируемого лейкоцитами человека и ассоциированного с процессом интерфероногенеза
7.4. Разработка методов выделения антибактериального фактора из продуктов биосинтеза интерферона
7.5. Разработка методов очистки и концентрации антибактериального фактора, полученного из продуктов биосинтеза интерферона
7.6. Физикохимическая характеристика фактора, отвечающего за антибактериальную активность препаратов интерферона
Глава 8. Изучение антибактерильных свойств пептидного комплекса, синтезируемого донорскими лейкоцитами под действием вируса Сендай индуктора интерфероногенеза
8.1. Материалы по экспериментальной оценке про гивомикробного
действия пептидного комплекса
8.2. Оценка антибактериального действия низкомолекулярного
пептидного комплекса на культуры микроорганизмов, изолированные из мочи детей с инфекциями мочевой системы
Заключение
Выводы
Список литературы


Показаны изменения энергетического потенциала мембран микробных клеток и ультраструктурных элементов цитоплазмы, плазматической мембраны стафилококков после их контакта с ИФН Коробов и др. Так, в году О. В. Бухариным и В. А. Гриценко описан катионный термостабильный белок интерцид молекулярной массой ,0,5 кДа, выделенный из лейкоцитов человека, который обладал широким спектром антимикробного действия в отношении грамположшельных и грамотрицаэельных микроорганизмов Гриценко и др. Бухарин и др. Согласно современным представлениям о качестве лекарств, наиболее предпочтительными средствами лечения являются препараты, включающие естественные защитные компоненты организма. В этой связи разработка способов получения таких веществ и использование их в качестве субстанций лекарственных средств является обоснованным подходом к созданию новых лечебных препаратов Масычева и др. Получение медицинских препаратов ИФН природного происхождения все еще остается достаточно сложной задачей. Видовая специфичность ИФН вынуждает проводить процесс его синтеза в культурах клеток человека. Но резерв этих клеток ограничен, они сложны в культивировании и всегда вызывают настороженность как потенциальные носители человеческих вирусов Кузнецов Попов, . ИФН может продуцироваться как стандартными однослойными культурами, так и суспензионными культурами клеток. Принято считать, что клетки во взвешенном состоянии более интенсивно продуцируют ИФН. Способность синтезировать ИФН обладают как первичные, диплоидные, так и перевиваемые линии клеток фибробластного и эпителиального типов. Активными продуцентами ИФН являются также элементы белой крови человека и животных Соловьев и др. Кузнецов и др. Степанов и др. Первые сведения о лимфобластоидных клетках v получены в г. Втипа, выделенную путем биопсии от больного лимфомои Бркитга. Через три года Н. ИФН под воздействием вируса Сендай . Ими были испытаны более 0 линий лимфобластоидных клеток на интерферонообразование и среди положительных результатов определен наиболее оптимальный продуцент, которым оказались клетки v. Технология получения интерферона на этой линии клеток интересна тем, что лимфобластоидный ИФН по своим свойствам очень близок к лейкоцитарному ИФН. ИФН относится к лейкоцитарному, продуцируемому лейкоцитами человека. Не менее от общей активности относилось по антигенной структуре к фибробластному ИФН. Лимфобластоидный ИФН является дешевым источником ИФН для лечения онкологических больных, а также для биохимических исследований с целью расшифровки его структуры Анджипарижзе и др. Для получения фибробласгного ИФН человека используют культуры диплоидных клеток, из которых наилучшими продуцентами являются диплоидные клетки крайней плоти человека. При культивировании они способны накапливаться в больших количествах, а для поддержания исходной диплоидной структуры в течение длительного времени их рекомендуется сохранять в атмосфере жидкого азота при температуре минус С ii . Процесс биосинтеза ИФНгамма является более продолжительньш, чем биосинтез ИФНальфа, хотя это в значительной мере зависит от используемог о индуктора. Дтя классического индуктора ИФН у стафилококковою энтеротоксина А оптимальный срок биосинтеза часа. При этом наиболее эффективным способом культивирования клеток является роллерный при нагрузке 5 млн. Другие иммуногенные метаболиты стафилококка энтеротоксин В, белок А также являются активными индукторами, но не нашли пока широкого применения в технологии получения ИФН 7 Коробко и др. Лишь в последнее время были определены оптимальные условия прайминга для данного вида ИФН эффективная активация синтеза ИФНу достигалась либо высокими дозами ИФН а, либо низкими дозами ИФНу и МП мл, соответственно. Установлено также , что предварительная обработка суспензионных культур лейкоцитов периферической крови человека ЧЛИ в конце прации едмл повышает в раз продукцию ИФНу, индуцированного конкавалином . Однако, более перспективным представляется использование коиндукторов известных иммуностимуляторов интерлейкина 2 или Тактивина Кузнецов и др.