Комплексная технология биологически активной добавки к пище "Тинростим" и препарата холинэстеразы из ганглиев кальмаров

• Автор: Михеев, Евгений Валерьевич
• Шифр специальности: 05.18.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 123 с. : ил.

Содержание
Введение

1. Обзор литературы.

1.1. Строение и свойства цитомединов.

1.2. Характеристика БАД Тинростим

1.3. Биологическая роль, строение и свойства холинэстераз.

1.4. Холинэстеразы гидробионтов .

1.5. Методы выделения и очистки холинэстераз .

1.5.1. Солюбилизация ХЭ е помощью детергентов

1.5.2. Солюбилизация с помощью ферментов .

1.5.3. Солюбилизация органическими растворителями

2. Материалы и методы
3. Результаты и обсуждение
3.1. Характеристика сырья ганглиев головоногих моллюсков
3.2. Модификация метода получения БАД Тинростим.
3.3. Технологические характеристики ганглиев кальмаров как сырья
для получения препарата ХЭ
3.3.1. Определение рациональных сроков хранения сырья.
3.3.2. Определение рациональных параметров экстракции ХЭ
3.4. Методы солюбилизации и очистки фермента
3.4.1. Определение параметров обезжиривания сырья органическими растворителями .
3.4.2. Очистка ХЭ методом фракционирования сульфатом аммония .
3.4.2.1. Характеристика процесса получения препаратов ХЭ из сублимированных ганглиев кальмаров методом фракционирования сульфатом аммония
3.4.2.2. Характеристика препаратов ХЭ кальмаров, полученных
методом фракционирования сульфатом аммония
3.4.3. Солюбилизация ХЭ нервной ткани кальмаров тритоном Х0 .
3.4.3.1. Определение параметров обработки сырья детергентом тритон
з
3.4.3.1. Определение параметров обработки сырья детергентом тритон Х0 .
3.4.3.2. Характеристика препарата ХЭ полученного с использованием тритона Х0 .
3.4.4. Исследования влияния ферментов на процесс выделения ХЭ ганглиев кальмаров
3.4.5. Характеристика препаратов ХЭ, полученных с использованием ферментов
3.5. Комплексная технология получения фермента холинэстеразы и БАД Тинростим
3.5.1. Характеристика процесса
3.5.2. Характеристика препаратов ХЭ и БАД Тинростим, полученных комплексным методом .
3.6. Обсуждение.
3.7. Заключение.
Выводы
Список литературы


Применение этих препаратов позволяет восстанавливать функциональную активность различных физиологических систем организма (Морозов, Хавинсон, ). В ходе исследовании было установлено влияние цитомединов на неспецифическую резистентность организма. Цитомедины оказывают выраженное действие на активность лейкоцитов и макрофагов. Классифицируют цитомедины по специфической функции и по месту их образования (Кузник и др. Так, к цитомединам из органов нервной системы можно отнести комплексы полипептидов из серого и белого вещества спинного и головного мозга, соматических, вегетативных нервных стволов, а также вегетативных ганглиев и иных структур периферической и центральной нервной системы. На основе этих цитомединов разрабатываются нейропегггидные препараты различного типа действия (Морозов, Хавиисон, ). К нейропептидным препаратам, влияющим на неспецифичсскую- резистентность организма, относится тинростим (сырье для производства БАД). Тинростим -полипептид, выделенный из оптических ганглиев кальмара, представляет собой аморфный порошок белого или светло-кремового цвета, умерено растворимый в воде, растворах солей и кислот. В растворе щелочи тинростим растворяется плохо, образуя взвесь, не растворяется в органических растворителях, поэтому последние могут применяться в качестве осадителя тинростима из раствора. Именно о го свойство пептидов - способность коагулировать и выпадать в осадок в ацетоне - используется при получении тинростима. Значение pH раствора тинростима близко к нейтральному - 6,8. Изоэлектрическая точка находится в слабокислой зоне - при pH 4, (Боровская, Эпштейн, ). БАД «Тинростим» более лет производится на базе экспериментального производства ФГУП «ТИНРО-Центр». Принцип выделения цитомединов в целом основан на экстракции тканей уксусной кислотой-с последующим центрифугированием и получением надосадочной-жидкости, которую затем обрабатывают ацетоном. В'рсзультате этого в осадок выпадает фракция, содержащая преимущественно пептиды и небольшую примесь белков (Морозов, Хавинсон, ). Данная технология позволяет добиться довольно большого (до 1 %) выхода пептидов (Говоруха и др. S7). При добавлении ацетона к экстракту в соотношении экстракт и ацетон 1 : 4 образуются мелкие хлопья, которые преимущественно оседают на стенки емкости п затем с трудом собираются - полного осаждения экстрагируемых веществ не происходит. При соотношении экстракт : ацетон 1 : 5 и более происходит образование крупных хлопьев, которые затем полностью осаждаются. Нейропептиды, получаемые одинаковым способом из различных источников, различаются по составу. Гак, цнтомедины, полученные из тимуса, различных областей головного мозга, а также костного мозга крупного рогатого скота, отличались по аминокислотному составу от полученных из оптических ганглиев кальмаров (табл. Качественный и количественный состав аминокислот, составляющих пептид, определяет его биологическую активность (Морозов и др. Отмечается, что различие по аминокислотному составу менее выражено между пептидами разных тканей теплокровных, чем между таковыми крупного рогатого скота и ганглиев кальмара. Цнтомедины крупного рогатого скота содержат большое количество серина, глицина, лизина, аланина, тогда как пептиды ганглиев кальмара содержат большое количество аспарагиновой и глутаминовой кислот. Это обусловливает различие в показателе соотношения основных и кислых аминокислот (В/А). При этом основные аминокислоты составляют ,3 %. Цнтомедины ганглиев имеют значительно более кислотный характер, чем цитомедины крупного рогатого скога. Следует отметить, что в НАД «Тинростпм», как и в пептидах крупного рогатого скота, очень низкая доля ароматических и серусодержащих аминокислот (табл. Исходя из этого можно предположить, что тинростим по своим свойствам объединяет биологическую активность цитомединов как системы иммунитета, так и головного мозга. Предполаї'алось, что БАД «Тинростим» должен обладать не только иммунными свойствами, но и широким фармакологическим спектром действия, что было подтверждено дальнейшими клиническими испытаниями (Говоруха и др. В ходе хроматографических исследований в тинростиме . A.c.