Исследование свойств микроорганизмов Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и разработка тест-системы для их идентификации

• Автор: Беспоместных, Константин Владимирович
• Шифр специальности: 05.18.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Кемерово
• Количество страниц: 125 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР.

1.1. Общие принципы и схемы классификации молочнокислых бактерий.

1.2. Фенотипические и физиологобиохимические характеристики

бактерий рода i

1.2.1. Таксономические характеристики бактерий рода i

1.2.2. Морфологические свойства бактерий рода i i

1.2.3. Культуральные свойства лактобактерий.

1.2.4. Биохимические свойства лактобактерий.

1.3. Особенности молекулярногенетической структуры микроорганизмов рода i

1.4. Молекулярногенетические методы в идентификации молочнокислых бактерий
1.5. Заключение по обзору литературы и задачи исследований
2. ОРГАНИЗАЦИЯ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Организация выполнения работы
2.2. Объекты исследований.
2.3. Основные методы исследований.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ .
3.1. Изучение ферментационной активности штаммов . ii
. i, бактериальных заквасок и бактериальных концентратов
3.2. Изучение биохимических и фенотипических свойств микроорганизмов . ii . i
3.3. Анализ нуклеотидной последовательности ДНК, кодирующей
синтез 5 рРНК микроорганизмов Ь. с1е1ЬгиескН эиЬзр. Ьиапст.
3.4. Конструирование универсальных праймеров для амплификации гена Б рРНК Ь. с1е1Ьгиескп зиЬяр. Ьиапсш
3.4.1. Подбор и синтез родоспецифичных праймеров для амплификации гена 8 рРНК микроорганизмов I. с1е1ЬгиескИ зиЬэр. Ьи1апсш.
3.4.2. Подбор и синтез видоспецифичных праймеров и оптимизация параметров амплификации гена Б рРНК
3.5. Сравнение видовой специфичности ПЦР с классическими биохимическими методами.
4. ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
РАБОТЫ
4.1. Методика изготовления ПЦРтестсистемы и ее описание
4.2. Расчет затрат на проведение исследования с помощью ПЦРтестсистемы.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Со временем стали проводиться сравнительные исследования большого числа штаммов, выделенных из самых разнообразных источников, с привлечением большого набора признаков. При этом особое внимание стало уделяться поискам признаков устойчивых, отчетливо выраженных и коррелирующих друг с другом, что позволяет совершенствовать классификацию и идентификацию молочнокислых бактерий [, 8, 8]. Опубликован ряд работ, характеризующих различных представителей группы молочнокислых бактерий, а также схем для дифференциации отдельных видов [7, 5, 7, 8, 3, 1]. В г. Бейеринк предложил название Lactobacter для обозначения рода, включающего молочнокислые палочки и кокки, а затем первые отнес к роду Lactobacillus, а вторые - к Lactococcus. Орла-Иенсен объединил эти микроорганизмы в одно семейство Lactobacteriaceae. Ленис создал схему классификации молочнокислых бактерий, где он распределил вес известные к тому времени виды в четыре группы. В центре каждой группы находился типичный вид, название которого принималось за название всей группы [, 0, 1]. Первым крупным и выдающимся трудом, посвященным молочнокислым бактериям, на котором основывается большинство современных классификаций этой группы микроорганизмов, явилась монография Орла-Иенсена. Автор делит бактерии на две основные группы: А - истинные и Б -ложные. Группа А включает кокковые и палочковидные формы. Кокковые объединяются в роды Streptococcus и Betacoccus. Род Streptococcus разделяется Орла-Иенсеном на группы по количеству клеток в цепочке. Внутри группы виды различаются по отношению к сахарам, температурным диапазонам роста, расщеплению казеина. Род Betacoccus включает два вида, различия между которыми основаны на сбраживании пентоз [0]. Молочнокислые палочки (группа А) автор делит на три рода - Thermobacterium, Streptobacterium и Betabacterium. В последних схемах классификации молочнокислых бактерий эти родовые названия приняты (как названия подродов). Отнесение микроорганизмов к указанным таксонам, основанное на легко устанавливаемых в лаборатории устойчивых признаков, облегчает задачу определения выделяемых штаммов молочнокислых палочек. В основу схемы определения видов по Орла-Иенсену положен признак сбраживания источников углерода. Сам автор понимал ненадежность этого теста и указывал, что сбраживание тех или иных субстратов зависит, в частности, от количества и качества доступных форм азота. Систематическими признаками Орла-Иенсен называл минимальную, оптимальную и максимальную температуры роста [, 8, 0]. После работ Орла-Иенсена появился ряд новых классификаций молочнокислых бактерий. С.А. Королев высказал ряд положений о принципах классификации бактерий вообще. Так, он считал, что реальное разграничение видов и родов (дробление их) должно базироваться не на каких-либо логических построениях, а прежде всего - на реальной возможности определенно и точно находить установленные границы в природе; выбор признаков для составления характеристик должен базироваться на реальной выпуклости, постоянстве и определенности признаков; критерием важности признаков при их отборе следует признать их фактическую связанность между собой []. Предлагаемая С. А. Королевым «Практическая схема классификации» молочнокислых бактерий является, по существу, схемой Лениса с внесением ряда поправок и изменений. Одним из крупных исследований, где имеется разработка классификации как палочковидных, так и кокковых форм, является седьмое издание определителя Берги. Молочнокислые бактерии объединены в семейство Lacto-bacillaceae, которое делится на трибы Lactobacilleae (род Lactobacillus) и Streptococceae (роды Streptococcus, Pediococcus и Leuconostoc) [, ]. В настоящее время еще не разработана общепринятая систематика молочнокислых бактерий, которая отражала бы родственные, филогенетические взаимоотношения между отдельными группами молочнокислых бактерий, однако были сделаны значительные успехи не только в области разработки методов, используемых для выявления свойств бактерий, но предприняты шаги и в направлении поисков доказательств существования родства между видами отдельных родов молочнокислых бактерий, а также между этими микроорганизмами и представителями иных семейств.