Совершенствование определения видовой принадлежности баранины и козлятины на основе иммуно- и ДНК-диагностики

• Автор: Пермяков, Александр Николаевич
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с. : ил.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Значение идентификации продукции

1.2. Методы определения видовой принадлежности мяса

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

2.1.1. Материалы исследований.

2.1.2. Методика идентификации мяса на основе иммунодиффузии

2.1.3. Выделение ДНК из нетермообработанных образцов баранины и козлятины с помощью тестсистемы i
2.1.4. Выделение ДНК из баранины и козлятины, подвергнутых термической обработке, с помощью тестнабора
i X
2.1.5. Методика идентификации козлятины и баранины на основе ПЦР с последующей ДНКгибридизацией.
2.1.6. Модифицированная методика идентификации баранины и козлятины на основе амплификации с последующей гибридизацией.
2.1.7. Методика идентификации баранины и козлятины с помощью ПЦР
в режиме реального времени.
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Усовершенствование идентификации мяса мелкого рогатого скота
з
на основе иммунодиффузии.
2.2.2. Усовершенствование методов идентификации баранины и
козлятины на основе ДНК
диагностики
2.2.2.1. Усовершенствование методов идентификации баранины и
козлятины на основе амплификации с последующей ДНКгибридизацией с использованием стандартизованных по международным требованиям тестсистем 8игеРоос1 Германия
22. Разработка модифицированной методики идентификации баранины и козлятины на основе амплификации с последующей ДНКгибридизацией
2.2.2.3. Усовершенствование методов идентификации баранины и
козлятины на основе ПЦР в режиме реального времени
2.2.3. Сравнительный анализ методов идентификации баранины и козлятины при различных условиях температурной обработки
2.2.3.1. Влияние условий хранения баранины и козлятины на эффективность методов видовой идентификации на основе ДНКдиагностики и иммунодиффузии.
2.2.3.2. Влияние термической обработки мяса на эффективность методов идентификации баранины и козлятины.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАИЙ.
ВЫВОДЫ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Разработана модифицированная методика идентификации баранины и козлятины, включающая выделение ДНК с использованием 3 СТАВбуфера, амплификацию ДНК с биотинилированными праймерами, гибридизацию меченных ампликонов с иммобилизованными ДНКзондами и фогоколориметрическое детектирование гибридных молекул по интенсивности окрашивания после реакции с конъюгатом и субстратом. Проведена валидация методов пробоподготовки с сорбентом силико и постановки ПЦР в режиме реального времени ПЦР РВ с компонентами тестсистем БигеРоос для идентификации баранины и козлятины. Данная методика позволяет дифференцировать баранину, козлятину и мышцы собаки и сократить время анализа в 3 раза. Проведен сравнительный анализ влияния хранения и различных способов технологической обработки баранины и козлятины на эффективность методов идентификации и показано, что наиболее эффективными для идентификации как термообработанных, так и не термообработанных продуктов являются методы ДНК диагностики. Практическая ценность. На основе проведнных исследований разработаны Методические рекомендации по идентификации козлятины и баранины на основе иммунодиффузии, утвержднные Отделением ветеринарной медицины РАСХН г. Апробация работы. Публикации Результаты исследований отражены в 5 научных статьях. Значение идентификации продукции. Проходящая в настоящее время реформа технического регулирования затрагивает основные механизмы формирования новой системы обязательных требований, оценки и подтверждения соответствия, процедур контроля и надзора, аккредитации и стандартизации продукции, в том числе ее идентификации. Она способствует исключению из потребления фальсифицированной продукции, которая представляет серьезную угрозу для здоровья населения. Предупреждения действий, вводящих в заблуждение приобретателей является одним из основных тезисов Федерального закона О техническом регулировании и свидетельствует о важном значении идентификации в обеспечении безопасности. В обороте очень часто происходит реализация некачественной и опасной продукции, употребление которой наносит существенный вред жизни и здоровью людей окружающей среде и имуществу потребителей. Проверки, проводимые Центрами стандартизации и метрологии, выявили по некоторым видам продукции значительный процент некачественных и фальсифицированных товаров, что негативно сказывается на интересах потребителей. Для обеспечения безопасности и интересов потребителей и производителей уже разработаны и разрабатываются технические регламенты, которые являются Федеральными законами и повышают ответственность производителей за реализацию некачественных фальсифицированных товаров. В этих законах даются основные требования к безопасности, а также правила подтверждения соответствия, идентификации продукции государственного контроля и надзора 3, , , , , . Таким образом, идентификация продукции является одним из основных элементов технического регулирования. При этом идентификация мяса и, в частности баранины и козлятины, имеет очень важное значение, т. Мясом называют совокупность тканей, получаемых при убое животного и отделении несъедобных частей туши шкуры, рогов, копыт, перьев и т. Мясо и продукты его переработки колбасные изделия, консервы, полуфабрикаты являются и наиболее часто фальсифицируемыми продуктами, так как относятся к наиболее ценным продуктам питания . Мясо идентифицируют по виду, полу, возрасту, упитанности и термическому состоянию . Фальсификация по видовому составу является наиболее распространенной. В зависимости от вида убойного животного различают говядину, свинину, баранину, козлятину, конину, оленину, мясо кроликов, сухопутной и водоплавающей домашней птицы. Помимо этого в пищу используется мясо диких животных лося, косули, дикого северного оленя, пятнистого оленя, благородного оленя марал, изюбр и др, кабарги, сайгака, серны, козерога, дикого барана, кабана, медведя, барсука, зайца, дикого кролика, бобра. Идентификация свежего и необработанного мяса проводится морфологическими и анатомическими методами ,,. Однако в обработанном виде мясо утрачивает характерные морфологические признаки, , что создает благоприятные условия для фальсификации видовой принадлежности мясопродуктов.