Разработка методов и тест-систем ускоренной индикации Yersinia Enterocolitica в кормах и мясных продуктах на основе ДНК-диагностики

• Автор: Светличкин, Олег Вячеславович
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Характеристика иерсиний и их распространение в

объектах ветеринарносанитарного контроля

1.2. Методы индикации и идентификации иерсиний

1.2.1. Бактериологический метод индикации У. еМегосоПпса.

1.2.2. Иммунологические методы

1.2.3. Методы ДНКдиагностики

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы исследований.

2.2. Методы исследований

2.2.1. Выделение хромосомных ДНК бактерий.

2.2.2. Выделение плазмидной ДНК
2.2.3. Включениетритиевой метки в ДНК методом никтрансляции .
2.2.4. Включение биотиновой метки в ДНК методом никтрансляции
2.2.5. Получение меченых зондов с помощью
полимеразной цепной реакции
2.2.6. Гибридизация ДНК с тритиевой меткой.
2.2.7. ДНКгибридизация с использованием тестнабора
с ДНКзондами, меченными биотином.
2.2.8. Методика гибридизации колоний.
2.2.9. Методика полимеразной цепной реакции.
2.2 Амплификация ДНК методом рассеянной затравки.
2.2 Статистическая обрабока результатов
2.3. Результаты исследований
2.3.1. Разработка тестсистемы индикации У. еШегосойПса
на основе ПЦР
2.3.2. Разработка методов и тестсистем индикации У. етегосоПбса с
использованием генных зондов.
2.3.3. Разработка методик индикации патогенных штаммов
У.еШегосоПиса с использованием плазмидной ДНК.
2.3.4. Оценка методов и тестсистем ДНКдиагностики для выявления
У.еЫегосоПЕса при мониторинге кормов и мясной продукции .
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ШегосоПпса с использованием плазмидной ДНК разработана тестсиситема индикации патогенных и непатогенных штаммов У. Пбса на основе амплификации и ДНКгибридизации. Практическая ценность. Методические указания по индикации У. Ппса методом полимеразной цепной реакции утверждены Департаментом ветеринарии МСХ РФ, г. Методические рекомендации по индикации У. ШегосоПбса в продуктах и кормах на основе ДПКдиагностики утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН . Апробация работы. Всероссийской научнопроизводственной конференции Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарии г. Ставрополь,
Международной конференции молодых ученых Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов г. Щелково,
Международной конференции молодых ученых Научные основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов ВНИТиБП РАСХН г. Щелково, г. Международной научной конференции Биотехнология на рубеже двух тысячелетий г. Саранск, г. Ученого совета ВНИИВСГЭ г. Публикации. По современной классификации род ii относится к семейству i и включает видов . К роду ii относится еще вид . Vi . Наиболее этиологически значимыми в патологии человека и животных яаляются . Бактерии . Впервые возбудитель кишечного иерсиниоза . США в году. Первые случаи заболевания иерсиниозом у людей и животных были зарегистрированы во Франции, Бельгии и Швеции в гг. Ющенко Г. В., Дунаев В. И., Бурыкина И. М., Vi . По данным отечественных ученых в е годы кишечный иерсиниоз был диагностирован в Москве, Московской области, Ленинграде, на Дальнем Востоке, Архангельске и других регионах России БреховаКолесникова Л. В., Гречищева Т. С., Дунаев В. И., Корженкова М. П. и др. Ющенко Г. В. и др. Ющук Н. Д. и др. Кишечный иерсиниоз регистрируется в любое время года, однако, наибольший подъем наблюдается в период с марта по апрель Ющенко Г. В., . Ценева Г. Я., ,. В связи с этим некоторые авторы предлагают ввести для людей, заразившихся на производстве, термин профессиональный иерсиниоз Колос Е. Н. и др. Гордейко В. А. и др. Каландадзе Е. П. и др. Юшенко Г. В.и др. Представители рода ii являются факультативными аэробными грамотрицательными палочками или коккобактериями, расположенными в мазках поодиночке, но иногда образующими длинные цепочки неразделившихся клеток. Наиболее приемлемый для роста бактерий водородный показатель среды 7,2 7,4. Оптимальный температурный режим для роста иерсиний С. Рост прекращается при температуре выше С. Важной особенностью . Ющенко Г. В., Дунаев В. И., Ющенко Г. В., , вследствие чего . Славчев Г. Славчев Г. Цанев Н. МПА, МПБ , а также способна расти на голодных средах голодно кислый агар, фосфатно буферный раствор, физиологический раствор. В жидких средах МПБ, бульон Хоттингера образуют равномерное помутнение. На плотных питательных средах МПА, агар Хоттингера через часов образует круглые полупрозрачные колонии диаметром 0. На среде Эндо через часа . Выращивание при С стимулирует образование форм Ценева Г. Я., Шумилов К. В., и др. Ценева Г. Я., . Антигенная структура . Н термолабильным, а также соматическим О термостабильным. V и , а также характерные для отдельных сероваров протеины, детерминируемые плазмидой кД Ценева Г. Я., . С Ценева Г. Я., ,. Термостабильный и устойчивый к действию этанола О антиген . Среди людей и животных наиболее часто обнаруживаются серовары , 2а,3 а, 2 в,3 , , , , , ,8 0 3,7 4 5 8 9,8 0 1 и 2 Ценева Г. Я., . Большинство штаммов, выделенных от людей, животных и из внешней среды принадлежат сероварам , , ,8 ,. Ющенко Г. В., Гурлева Г. Г., Митрикова и др. Стефанов И. Ценева Г. Я., . Ющенко Г. В., Ценева Г. Я., . Так, . Дунаев В. И. и др. Юшенко Г. В., Ценева Г. Я., , Шумилов К. В. и др. Патогенные иерсинии это энтеропатогенные факультативные паразиты. Для большинства циркулирующих в организме животных и человека штаммов . Ценева Г. Я., . Этот токсин продуцируется как при С, так и при С Славчев Г. Ценева Г. Я., . По некоторым данным, из числа штаммов . Другие представители . Ценева Г. Я., .