Биологические свойства рекомбинантного штамма Bacillus Subtilis 2335/pВМВ105 и перспективы его использования в составе прибиотиков ветеринарного назначения

• Автор: Гулейчик, Ирина Александровна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 170 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1.0БР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Пробиотические препараты на основе бактерий рода i. механизм действия и биологические свойства

1.2. Интерфероны характеристика и биологические свойства

1.3. Генетически модифицированные микроорганизмы экологическая безопасность и перспективы использования в составе пробиотиков

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Оценка биологических свойств штамма i ii рВМВ5 на лабораторных моделях

2.2.1.1. Оценка генетической стабильности штамма i ii рВМВ

2.2.1.2. Сравнительная оценка антагонистической активности штаммов i ii рВМВ5 и i ii 3
2.2.1.3. Влияние штамма i ii рВМВ5 на микробиоценоз кишечника цыплят
2.2.1.4. Влияние штамма i ii рВМВ5 на гематологические показатели организма здоровых цыплят
2.2.1.5. Оценка протективной активности штаммов i ii рВМВ5 и i ii в модели экспериментальной сальмонеллезной инфекции цыплят
2.2.2. Оценка иммуногропных свойств штамма i ii рВМВ
2.2.2.1. Влияние штамма i ii рВМВ5 на клеточное
звено иммунного ответа
.2.2. Влияние штамма i ii рВМВ5 на интенсивность гуморального иммунного ответа на тимусзависимый антиген
2 Влияние штамма i ii рВ1В5 на иммунологические, микробиологические и биохимические параметры организма здоровых цыплят
2.2.3.1. Влияние штамма i ii рВМВ5 на уровень неспецифической резистентности здоровых цыплят
2.2.3.2. Влияние штамма i ii рВМВ5 на микробиоценоз кишечника здоровых цыплят
2.2.3.3. Влияние штамма i ii рВМВ5 на уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови
2.2.4. Сравнительная оценка влияния штаммов i ii рВМВ5 и i ii на микробиологические и иммунологические параметры организма цыплят в модели антибиотикоассоциированного дисбактериоза
2.2.4.1. Влияние штаммов i ii рВМВ5 и i ii на активность сывороточного лизоцима
2.2.4.2. Влияние штаммов i ii рВМВ5 и i ii на бактерицидную активность сыворотки крови
2.2.4.3. Влияние штаммов i ii рВМВ5 и i ii на активность и интенсивность фагоцитоза
2.2.4.4. Влияние штаммов i ii рВМВ5 и i ii на уровень общего белка и его фракций в сыворотке крови 0
2.2.4.5. Влияние штаммов i ii рВМВ5 и i i i на популяционный уровень основных представителей ки
шечного микробиоценоза
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 9
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Среди факторов, с помощью которых пробиотики оказывают действие на организм животного, выделяют такие главные феномены как нормализация кишечного биоценоза, повышение колонизационной резистентности против инфицирования условнопатогенными бактериями, а также их влияние на иммунный статус. Механизм действия пробиотиков направлен на принудительное заселение кишечника конкурентоспособными штаммами бактерийпробионтов, которые осуществляют неспецифический контроль за численностью условнопатогенной микрофлоры, вытесняя ее из состава
кишечной популяции и сдерживая усиление факторов патогенности у ее представителей 8. Идея целенаправленного изменения состава микрофлоры желудочнокишечного тракта принадлежит основоположнику отечественной микробиологии И. И. Мечникову. Предложенный им метод энтерального введения живых культур молочнокислых бактерий в качестве антагонистов гнилостных микробов явился началом современных исследований в области бактериотерапии и профилактики различных патологических состояний, связанных с нарушениями в составе нормальной кишечной микрофлоры 9. Неоспоримым преимуществом препаратов этого типа является их физиологичность для организма и связанная с ней экологическая безопасность. Существенную роль в проявлении лечебного действия пробиотиков наряду с антагонистической активностью играют их витаминообразующие, ферментативные и иммунизирующие свойства , . В последние годы в медицинской и ветеринарной практике все большее распространение получают биопрепараты, основой которых являются бактерии рода i , , , 4, 6. Известно, что нормальная микрофлора желудочнокишечного тракта состоит из двух четко очерченных групп эндогенной автохтонной обнаруживаемой постоянно в значительных количествах в различных отделах пищеварительного тракта, и экзогенной аллохтонной, транзиторной регулярно поступающей в пищеварительный тракт извне, оказывающей действие на макроорганизм преимущественно в период поступления , 6, 8. Сапрофитные спорообразующие аэробные бациллы типичные представители экзогенной нормальной микрофлоры теплокровных. Представители этого рода характеризуются высокой приспособляемостью к условиям внешней среды, которая главным образом определяется их способностью образовывать споры. Большинство пробиотических препаратов содержит различные штаммы одного вида спорообразующих бактерий i ii, в состав некоторых медицинских препаратов включены штаммы i iii. В опытах на различных животных установлено,
что в течение первых двух часов после введения около общего количества спор переходят в вегетативные формы 7. Процесс прорастания спор сопровождается интенсивным продуцированием, в том числе экстрацеллюлярным, ряда физиологически активных веществ. Кроме того, обладая богатым набором конститутивных и адаптивных ферментов, они способны синтезировать различные аминокислоты, в том числе незаменимые . Одним из главных свойств в положительном влиянии i ii на макроорганизм является их способность к синтезу антибиотических веществ и связанное с этим антагонистическое действие в отношении широкого спектра патогенных и условнопатогенных микроорганизмов 0, 5, 7. Количество антибиотиков, продуцируемых аэробными спорообразующими бактериями рода i, приближается к 0, а из различных штаммов i ii их выделено и описано около . Благодаря тому, что некоторыми штаммами бацилл синтезируются не один, а несколько сходных по базовой структуре, но отличающихся по концевым группировкам пептидов, антибиотическое действие оказывается разнообразным, а формирование устойчивых вариантов чрезвычайно замедленным 7. Антагонистическое действие аэробных спорообразующих бактерий определяется также их высокой конкурентоспособностью в процессе размножения, что объясняется широкой приспособляемостью к условиям культивирования и воздействию неблагоприятных факторов 5. В опытах i vi была выявлена антагонистическая активность В. Наиболее чувствительными к препаратам на основе бацилл оказались стафилококки, стрептококки, протеи и грибы рода i. В меньшей степени, но хорошо выраженный антагонизм отмечен в отношении эшерихий, сальмонелл, клебсиелл и шигелл.