Методы индикации и идентификации бруцелл с учетом изменчивости возбудителя

• Автор: Братцев, Александр Юрьевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Барнаул
• Количество страниц: 164 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика возбудителя бруцеллеза.

1.2. Изменчивость возбудителя и ее значение в патологии.

1.3. Биологические свойства форм бруцелл

1.4. Методы индикации и идентификации бруцелл.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований

2.2. Условия и закономерности образования форм бруцелл видов В. и 4го биотина В. i В. ii i vi

2.3. трансформация бруцелл видов В. и 4го биотипа В. i

В. ii i viv

2.3.1. Образование форм В.

2.3.2. Образование форм 4 биотипа В. i В. ii
2.4. Морфологические, культуральные, тинкториальные, биохимические, антигенные, агглютинабельные и вирулентные свойства фенотипов бруцелл, полученных i vi.
2.5. Морфологические, культуральные, тинкториальные, биохимические, антигенные, агглютинабельные и вирулентные свойства фенотипов бруцелл, выделенных от животных
2.6. Электронномикроскопическое исследование вариантов бруцелл
2.7. Морфометрический метод оценки патогенности вариантов бруцелл различного происхождения и культурревертантов,
полученных от них.
2.8. Сравнительная оценка методов индикации и идентификации бруцелл с учетом изменчивости возбудителя.
2.8.1. Многократные пересевы форм бруцелл на искусственных
питательных средах
2.8.2. Пассирование Ьформ бруцелл через организм лабораторных
животных
2.8.3. Индикация Ьформ бруцелл с применением Ьантисыворотки
2.8.4. Метод комплексной идентификации Ьформ бруцелл.
3. ОБСУЖДЕИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
4. ВЫВОДЫ.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ.6

введение
Актуальность


Специфика проявления и течение бруцеллезной инфекции в северном оленеводстве характеризуется наличием и сохранением природных очагов инфекции среди поголовья дикой популяции, постоянной угрозой пересечения путей миграции и смешения стад диких и домашних северных оленей В. А. Забродин, , Е. Ф. Забродина, А. Г. Вольфсон, Л. II. Гордиенко, . С развитием пантовомясного направления в северном оленеводстве, кроме экономического ущерба, наносимого бруцеллезной инфекцией, существует опасность заражения бруцеллезом людей В. А. Забродин, Л. Н. Гордиенко с соавт. Бруцеллы хорошо растут на многих питательных средах. В нашей стране успешно применяется мясопептонопеченочный агар МИНА с добавлением глюкозы и глицерина. Можно также использовать эритритагар, i Альбими и картофельный. Оптимальными условиями для роста бруцелл являются температура С, 6,,2. При выделении первичных культур, непосредственно из патологического материала, для некоторых видов В. В. 1,2,3,4 требуется присутствие углекислого газа СО2. Бруцеллы, особенно в первой генерации, растут медленно 4 суток и более, поэтому среды с посевами выдерживают в термостате в течение трех недель. Лабораторные культуры развиваются быстрее, в среднем фаза у них равна часам и зависит от состава питательной среды и количества засеваемого материала. При выращивании на плотной питательной среде колонии бруцелл гладкого типа мелкие, величиной в диаметре мм, куполообразные с крупными очертаниями и цельными краями. При просмотре колонии прозрачные, цвета меда и имеют тенденцию темнеть при старении культуры. При наблюдении сверху с помощью отраженного света у колоний голубоватосерая опалесценция Н. А. Михин, . Колонии в гладкой форме при окраске кристалвиолетом специальным методом, разработанным УайтВилсоном i, i, , обычно имеют светложелтый цвет на темносинем фоне окрашенной среды. При посеве петлей штрихом культуры бруцелл образуют нежный, блестящий, прозрачный, постепенно грубеющий влажный налет. На бульоне после посева бруцелл наблюдается вначале его равномерное помутнение. Затем по мере старения культуры выше уровня жидкости постепенно образуется пристеночное кольцо голубоватосерого цвета. При микроскопии мазков под обычным увеличением бруцеллы просматриваются как мелкие кокки размером 0,,6 мкм или как палочковидные формы величиной 0,6x2,5 мкм с закругленными концами. Спор, капсул не образуют и не имеют жгутиков. По методу Козловского бруцеллы окрашиваются в яркокрасный цвет, по Граму в розовый Н. А. Косилов, . При исследовании с помощью электронного микроскопа было установлено, что бруцеллы имеют сложное строение. Оболочка клетки состоит из ряда внешних и внутренних мембран. Цитоплазма представлена нуклеоидом очень большой величины и множеством рибосом. Для форм характерны извилистая наружная мембрана, низкая электроннооптическая плотность цитоплазмы содержащей различные включения Т. А. Толмачева с соавт, , . В процессе жизнедеятельности бруцеллы видов биовары 1,2,3,4,9 и большинство 6 и 7, а также продуцируют сероводород . Основные антигены бруцелл содержат гладкие и шероховатые липополисахаридные комплексы и и два связанных полисахарида нативный гаитен и Вполисахарид и по меньшей мере протеиновых и гликопротеи новых антигенов. Полисахаридные антигены локализуются на поверхности, в то время как большинство протеиновых антиген встречаются внутри клетки бруцелл. Липополисахариды и некоторые протеиновые антигены используют в диагностических тестах и при приготовлении вакцин. Молекулы несут А и М эпитопы, имеющие различное количественное соотношение среди биоваров гладких форм бруцелл. Роль отдельных антигенов в диагностических реакциях до конца не изучена. Однако окончательно установлено, что является главным антигеном, участвующим в стандартных, общепринятых серологических тестах реакции агглютинации РА, реакции связывания комплемента РСК, розбенгал пробе РБГ1 и кольцевой реакции с молоком КР. Нативные гаптены и полиВгаптены, которые родственны с , используются в реакции иммунодифузии РИД для дифференциации зараженных животных от иммунизированных И. А. Косилов, . Разные виды бруцелл неодинаково патогенны для человека и отдельных видов животных. Например, все три биовара вида В.