Усовершенствование диагностики копытной гнили овец с помощью молекулярно-генетических методов

• Автор: Алексеева, Светлана Викторовна
• Шифр специальности: 06.02.02, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Копытная гниль овец.

1.1.1. Общие сведения, распространение,

экономическое значение

1.1.2. Этиология

1.1.3. Патогенез

1.2. ОмИеЬЬаМег пос1ояия.

1.2.1. Номенклатура и таксономия

1.2.2. Факторы вирулентности
1.3. Диагностика копытной гнили овец
1.3.1. Эпизоотологичсские данные
1.3.2. Клинический диагноз
1.3.3. Патологоанатомические признаки.
1.3.4. Лабораторный диагноз.
1.3.5. Дифференциальный диагноз.
1.4. Заключение по обзору литературы.
2. Собственные исследовании
2.1.Материалы и методы исследований
2.1.1. Материалы и оборудование.
2.1.2. Методы исследования
2.2. Резул ьтаты.
2.2.1. Разработка метода ПЦР амплификации фрагментов гена 8 рРИК для идентификации возбудителя копытной гнили овъ О.пос1о8и8
2.2.2. Разработка метода ПЦР амплификации вариабельного фрагмента генатЛ О.пос1от для типирования штаммов.
2.2.3. Реактивирование, изучение жизнеспособности, сохранности морфологических, тинкториальных
и культуральных свойств, а также молекулярно генетическое исследование штаммов сИе1оЬасег пснУояия из коллекции ВИЭВ им. Я.И.Коваленко.
2.2.4. Разработка способов подготовки проб патологического материала для выявления ДНК П.пос1озиз методом ПЦР
2.2.5. Проведение филогенетического анализа ти штаммов сЬе1оЬас1ег посозия по гену 1тЛ.
3. Обсуждение результатов исследования.
4. Выводы.
5. Практическое использование научных результатов исследования.
6.Рекомендации по использованию научных выводов.
7. Список использованной литературы.
8. Приложения.
Список сокращений
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
МППБ мясопептонный печеночный бульон среда КиттаТароцци
ОМП i наружный белок мембраны
ПА питательный агар
ПБ питательный бульон
ПЦР полимеразная цепная реакция
РА реакция агглютинации
РДП реакция диффузной преципитации
РИД реакция иммунодиффузии
РИФ реакция иммунофлуоресценции
РИГА реакции непрямой гемагглютинации
РНИФ реакция непрямой иммунофлуоресценции
РНК рибонуклеиновая кислота
РСК реакция связывания комплемента
рРНК рибосомная РНК прокариот с коэффициентом седиментации единиц Свсдберга
дезоксинуклеозидтрифосфаг I ИФА иммуноферментный анализ I иммуноглобулин
I Национальный Центр Биотехнологической Информации США фосфатный буфер
ii i полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
i i электрофорез в пульсирующем поле
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Предложен новый фрагмент гена 1тА, на основе которого проведен филогенетический анализ ти штаммов 1сИе1оЬааег пос1озт и обнаружена корреляция генотипов с серотипами возбудителя. Практическая значимость. Охарактеризован молекулярно генетически производственный штамм ПП Р1сИе1оЬас1ег посЬэиз, применяемый для производства вакцины Овикон. Проведена реактивация штаммов ске1оЬас1ег пос Разработана методика ГИДР, позволяющая с помощью амплификации фрагмента гена 8 рРНК с высокой специфичностью и чувствительностью осуществлять видовую идентификацию возбудителя сНе1оЬас1ег по1от в лабораторных условиях без предварительного культивирования. Разработаны Методические указания по идентификации возбудителя копытной гнили овец с помощью амплификациии фрагмента гена 8 рРНК методом ПЦР Приложение А, утвержденные Научно методическим советом МГАВМиБ 1 апреля г. Ьас1ег поАозт и молекулярной диагностике копытной гнили овец, а также для диагностических или производственных ветеринарных лабораторий. Личный вклад соискателя. Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении бактериологических, молекулярногенетических исследований, а также анализе и обобщении результатов работы. Апробация работ ы. Материалы работы доложены на Международной научно практической конференции по современным методам диагностики, профилактики и терапии заразных и незаразных болезней животных г. Ставрополь, г. Международной научно практической конференции, посвященной летию МГАВМиБ г. Москва, г. Результаты работы включены в годовые отчеты по ПИР кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней МГАВМиБ в гг. Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных статей, в том числе в 3х изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 3 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов и их обсуждения, выводов и списка использованной литературы, включающего 0 источников в т. Работа содержит таблиц и рисунков. Методика видовой идентификации В1скс1оЬас1ег псхЗояш с помощью амплификации фрагмента гена Б рРНК методом ПЦР в культуре или патологическом материале. Методика типирования штаммов ОюкеЬЬааег поЛоьиь с помощью амплификациии фрагмента гена1тА. Реактивация и исследование биологических и молекулярно генетических свойств штаммов й1ске1оЬасег пос1очт из коллекции ВИЭВ им. Я.И. Коваленко. Разработка способа подготовки проб патологического материала для проведения ПЦР на основе амплификации гена Б рРНК для выявления и идентификации скс1оЬас1ег пос1оят без проведения культуральных исследований. Филогенетический анализ штаммов ЛскеЬЬаМег пехояш на основе нуклеотидной последовательности вариабельного фрагмента гена тА и сравнение с результатами серологического метода РА. Автор выражает глубокую благодарность всему коллективу лаборатории молекулярной диагностики Института Вирусологии им. Д.И. Ивановского, НПО Нарвак в лице Алииера Т. Н., коллективу кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней МГАВМиБ, сотрудникам ВИЭВ в частности, Соколову М. Н. и специалистам Ставропольской биофабрики в частности, Геладзе В. III. Особую личную благодарность выражаю Гребенниковой Т. В., Буньковой Наталье, Панасюку С. Д., Соколовой . ., Ломакиной Н. Ф. и моим научным руководителям за Вашу безграничную поддержку. Копытная гниль это широко распространенная во всем мире инфекционная болезнь овец, вызываемая бактерией i , помимо которой для распространения заболевания и осложнения патологического процесса необходимо наличие некоторых других микробов и определенных факторов окружающей среды , 9. Ранее считалось, что копытной гнилыо заболевают только овцы и козы, позже появились данные о поражении ею в более легкой форме крупного рогатого скота, а также свиней, оленей и муфлонов , , , , . Распространению болезни по всему миру способствовала широкая международная торговля овцами в конце го начале го веков с целыо улучшения шерстной продуктивности местных пород. По данным ежегодников ФАОВОЗМЭБ за гг.