Усовершенствование методов выделения, идентификации индикации бактерий Pseudomonas Aeruginosa

• Автор: Шестаков, Андрей Геннадьевич
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 155 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация бактерий рода .

1.2. Биологические свойства i.

1.3. Устойчивость i к некоторым веществам.

1.3.1. Антибиоти ко чувствительность i

1.4. Резервуар распространения i и вызываемые бактериальные инфекции.

1.5. Способность i к биодеструкции

1.6. Идентификация i

1.6.1. Бактериологические методы идентификации
i.
1.6.2. Генетические методы идентификации
i.
1.7. Фагодиагностика i
1.7.1. Чувствительность бактериофагов i к
и накти вирующи м факторам.
1.7.2. Развитие фаговых корпускул в клетке хозяина.
1.7.3. Реакция нарастания титра фага.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект материалы и методы исследований
2.2. Результаты исследований и их обсуждение.
2.2.1. Тинкториальные свойства клеток i.
2.2.2. Рост референсштаммов i на стандартных средах и образование пигментов.
2.2.3. Характеристики отечественных селективных сред, применяющихся для выделения i.
2.2.4. Биохимические свойства референсштаммов
i
2.2.5. Антибиотикочувствительностъ референсштаммов
i.
2.2.6. Конструирование среды накопления УГСХАР.а.1
2.2.7. Усовершенствование плотной селективной среды с
цетримидом УГСХАР.а.2.
2.2.8. Конструирование тестов бактериологической дифференциации
2.2.8.1. Конструирование теста А
2.2.8.2. Разработка теста В.
2.2.8.3. Усовершенствование теста С.
2.2.8.4. Усовершенствование теста .
2.2.9. Усовершенствование бактериологической схемы
выделения и идентификации i.
2.2 Образование пигментов штаммами i, выделенных из объектов внешней
среды, пищевого сырья и пищевых продуктов
2.2 Основные биохимические свойства выделенных штаммов i
2.2 Выделение бактериофагов i
2.2 Характеристика выделенных фагов i
2.2 Разработка технологических параметров изготовления и контроля биопрепарата для диагностики i.
2.2 Разработка оптимальных условий постановки реакции нарастания титра фага с применением диагностического биопрепарата.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ..
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
Аг антиген
АДФ аденозин дифосфат ВСА висмут сульфит агар г. грамм
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота КОЕ колониеобразующие единицы ЛПС липополисахарид
МИК минимальная ингибирующая концентрация
м.к.мл количество микробных клеток в 1 мл
м.к.г количество микробных клеток в 1 г
мл милилитр
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
ПЦР полимеразноцепная реакция
РНФ реакция нарастания титра фага
ТТХ трифенил тетразолий хлорид
УФ ультрафиолетовые лучи
ЦПХ цетилперидиния хлорид
БЭБ додецил сульфат натрия
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Классификация семейства в последние годы претерпела значительные изменения, вызывая некоторую путаницу, поэтому целесообразно остановиться на ней несколько подробнее. В составе семейства по рРНК гомологии выделяют 5 групп. Род представлен 9 видами . i относится к первой группе рРНК гомологии и входит в подгруппу , наряду с Р. . i. Ранее к роду относили и других представителей семейства , однако в настоящее время они выделены в самостоятельные роды. Практическая необходимость видовой идентификации отдельных представителей семейства обусловлена задачами, стоящими перед бактериологами. i аэробные грамм отрицательные палочки, чаще всего прямые, редко слегка изогнутые. Средние размеры синегнойной палочки 13x0,51 мкм. В нативных препаратах, как и в препаратах из патологического материала бактерии подвижны, имеют один, иногда два полярных жгутика. У Р. . и . . . i подтвердил полярное монотрихиальное расположение жгутика. . и . обнаружили наличие у . Основная функция фимбрийприкрепление бактерий к субстратам. В мазках чистых культур, окрашенных по Граму, палочки расположены одиночно, попарно, либо в виде коротких цепочек. Поверхность бактерии покрыта микроворсинками, кроме того, . Образование слизи характерная особенность слизь придает характерную вязкость бульонным культурам и колониям мукоидных штаммов. Вирулентные, так называемые мукоидные штаммы, секретируют ото вещество более интенсивно, что дат основание рассматривать слизь как фактор патогенности. В процессе пассирования на простых питательных средах способность к слизеобразованию быстро утрачивается Сидоров, . . i спор и капсул не образует и растт в широком диапазоне температур 4 С, что указывает на способность длительно сохранятся в окружающей среде и противостоять защитному действию инфицированного человека. Отличительная особенность . . i хорошо растт на простых питательных средах в аэробных условиях при температуре С, а так же и при С Шуляк, . При культивировании в жидких питательных средах . По мере культивирования среда приобретает синезелный цвет, который позднее становится бурым. На плотных питательных средах образует весьма разнообразные колонии. При росте на плотных средах у многих штаммов наблюдают феномен радужного лизиса, развивающийся спонтанно. Феномен характерен только для . Более того, он индивидуально выражен у отдельных штаммов и его можно использовать для внутривидовой дифференциальной диагностики. При образовании пигмента происходит окрашивание некоторых сред например, агара МюллераХинтона в зеленый цвет Покровский, . На питательном агаре образует в основном два вида колоний большие диаметром 25мм полупрозрачные сероватого цвета, гладкие с плоскими краями и выпуклым центром глазунья и мелкие шероховатые. Вокруг колоний образуется зона, окрашенная в зелный цвет различных оттенков. Штаммы, выделенные из мочеполовых органов и респираторного тракта, могут образовывать слизистые колонии Сидоров, . На кровяном агаре многие штаммы образуют р гемолиз i, . Пигментообразование характерный и имеющий важное диагностическое значение признак только у клинических изолятов Шуляк, . Водорастворимый пигмент пноцианин, окрашивает питательную среду и отделяемое ран в синезелный цвет. В анаэробных условиях пигмент обычно бесцветный, но даже встряхивание среды приводит к появлению окраски. . i единственный известный вид бактерий, продуцирующий пиоцианин. В щелочной среде пиацианин имеет голубой цвет, а в кислой розовый. Подавляющее большинство культур образует зелный пигмент флюорисцеин, или пиовездин, флюорисцирующий при УФ облучении с длинной волны 4 нм Покровский, . Флюорисцеин растворим в воде, но не в хлороформе. Некоторые штаммы могут синтезировать и другие пигменты пиорубин красный. Цвет пигмента пиорубин на среде Кинг А варьирует от розового до тмнокаштанового.