Совершенствование производства вакцины холерной бивалентной химической таблетированной

• Автор: Ульянов, Александр Юрьевич
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 140 с. : ил.

Содержание

Сокращения и обозначения

Введение

1. Обзор литературы.

1.1. Характеристика различных методов культивирования, применяемых при производстве иммунобиологических препаратов

1.2. Ферментационное оборудование для культивирования микроорганизмов.

1.3. Масштабирование процессов микробиологического синтеза.

1.4. Методы и технологии, используемые при выделении антигенов

2. Собственные исследования.

2.1. Объект, материалы и методы исследований

2.1.1. Оборудование и приборы.

2.1.2. Материалы
2.1.2.1. Штаммы микроорганизмов
2.1.2.2. Лабораторные животные.
2.1.2.3. Холерные сыворотки
2.1.2.4. Производственная питательная среда
2.1.2.5. Реактивы и растворы.
2.1.3. Методы исследования
2.1.3.1. Физикохимические и биохимические методы.
2.1.3.2. Биологические методы.
2.1.3.3. Статистическая обработка результатов.
2.2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1. Конструирование и характеристики ферментера на базе реактора РЗРЯ,
2.2.1.1. Обоснование требований к разрабатываемому биореактору
2.2.1.2. Конструкционные особенности опытнопромышленного ферментера на базе реактора РЗРЯ,
2.2.1.3. Определение массообменных характеристик аппарата для ферментации.
2.2.1.4. Исследование процессов культивирования штаммов холерного вибриона продуцентов протективных антигенов холерной химической
вакцины
2.2.2. Разработка экспериментальной технологии концентрирования протективных антигенов штамма Vii 9В серовара Инаба методом тангенциальной ультрафильтрации.
2.2.2.1. Экспериментальная оценка эффективности использования мембран с номинальной отсечкой по молекулярной массе кДа для концентрирования протективных антигенов штамма Vii 9В серовара Инаба методом тангенциальной ультрафильтрации
2.2.2.2. Сравнительная характеристика применения мембран с различными номинальными отсечками по молекулярной массе для концентрирования протективных антигенов
2.2.2.3. Оптимизация технологического процесса концентрирования протективных антигенов.
2.2.2.4. Оценка возможности внедрения метода тангенциальной ультрафильтрации для концентрирования холерогенаанатоксина и Оантигена в промышленную технологию производства вакцины холерной бивалентной химической таблетированной
2.2.3. Сравнительное изучение препаратов протективных антигенов холерного вибриона и таблетированной холерной вакцины, полученных по традиционной технологии и с помощью разработанного ферментационного оборудования и по экспериментальной технологии.
2.2.3.1. Сравнительный анализ свойств протективных антигенов
2.2.2.2. Физикохимические и иммунобиологические свойства вакцины холерной бивалентной химической таблетированной, полученной с использованием экспериментальной технологии
Заключение
Список использованных литературных источников.
Приложения
Сокращения и обозначения
АЕ антитоксическая единица
АХС антихолерогенная сыворотка
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ЕС единицы связывания холерогена с сывороткой
лпс липополисахарид
МИБП медицинские иммунобиологические препараты
м.к. микробные клетки
НОММ номинальная отсечка но молекулярной массе
ОАГ Оантиген
ОСО отраслевой стандартный образец
РИД реакция иммунодиффузии в геле
РИГА реакция непрямой гемагглютинации
ТКИ А токсинкорегулируемые пили адгезии
ХА холерогенанатоксин
хт холерный токсин
ЕД доза вакцины, защищающая животных от гибели при заражении вирулентным штаммом
ео летальная доза, вызывающая гибель животных
Введение
Актуальность


Показано, что для интенсификации процесса мембранного концентрирования необходимо его проведение при следующих параметрах температура 2С, давления на входе и выходе фильтрационной установки 2,,1 и 0,,1 кгссм2 соответственно. Определн состав лиофилизированных протективных антигенов V скокгае 9В серовара Инаба по основным белковым и полисахаридным компонентам, даны сравнительные характеристики нового и традиционного препаратов. Выявлено, что готовая форма вакцины холерной бивалентной химической таблетированной, полученная по разработанной технологии по физикохимическим и иммунобиологическим свойствам соответствуют нормируемым требованиям и не отличается от коммерческого препарата, полученного по регламентной технологии. Практическая значимость работы заключается в том, что разработанный биореактор был успешно апробирован в технологическом процессе производства вакцины холерной бивалентной химической таблетированной. На биореакторе проведено восемь вырашиваний производственных штаммов холерного вибриона. Полуфабрикаты полученных протективных антигенов соответствовали требованиям нормативной документации. С учетом конструкционных особенностей аппарата и технологии культивирования штаммовнродуцентов основных протективных антигенов холерного вибриона разработаны инструкция по эксплуатации ферментера и стандартные операционные процедуры. На основании проведенных исследований по разработке экспериментальной технологии концентрирования протективных антигенов тангенциальной ультрафильтрацией обоснованы предложения по е внедрению в производство холерной вакцины. По результатам проведенных научных исследований разработаны методические рекомендации Концентрирование протективных антигенов холерного вибриона методом тангенциальной фильтрации, одобренные Учным советом РосНИПЧИ Микроб протокол 2 от марта г. Получен патент РФ на полезную модель 4. Разработанный биореактор в соответствии с актом утвержденным директором института марта г. Основные положения, выносимые на защиту. Разработан и создан биореакгор с высоким уровнем биологической защиты. Культивирование производственных штаммов холерных вибрионов на разработанном биореакторе обеспечивает получение кондиционных нативных Оантигена и холерогена, при сохранении их физиологических и морфологических свойств. Предложена оптимальная технология концентрирования тангенциальной ультрафильтрацией протективных антигенов УНто с1ю1егае 9В серовара Инаба. Экспериментальные серии вакцины, полученные с использованием разработанных биореактора и технологии концентрирования протективных антигенов холерного вибриона, по показателям качества соответствуют требованиям нормативной документации на вакцину холерную бивалентную химическую таблетированную. Работа выполнена в ФГУЗ РосНИПЧИ Микроб в рамках научноисследовательской темы 2 Оптимизация технологических этапов производства МИБП и разработка новых препаратов для диагностики ООН номер госрегистрании . Апробация работы. Основные результаты работы представлены на международной школеконференции молодых ученых Биология наука XXI века, Пущино, Всероссийской научнопрактической конференции Вакцинология . Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней, Москва, Международной научнопрактической конференции Вавиловские чтения, Саратов, Совещании проблемной комиссии . Холера и патогенные для человека вибрионы Координационного научного совета по санитарноэпидемиологической охране территории Российской Федерации РостовнаДону. П у б л и к а ц и и. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ и 1 патент. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающей в себя объект, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов, списка используемых литературных источников, включающего 6 источников, и приложений. Работа изложена на 0 страницах и иллюстрирована рисунками, таблицами.