Разработка технологии лиофильного высушивания гетерологичного антирабического иммуноглобулина

• Автор: Кочкалова, Наталия Николаевна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 141 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Основные принципы лиофилизации иммунобиологических лекарственных препаратов

1.1. Иммунобиологические лекарственные препараты иммуноглобулиновой природы

1.2. Лиофилизация как метод стабилизации иммунобиологических лекарственных препаратов

1.3. Лиопротекторы, применяемые при лиофилизации препаратов для

парентерального введения

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. Объекты, материалы и методы исследований

2.1. Объекты исследований
2.1.1. Иммуноглобулиновые препараты
2.1.2. Вирусный штамм
2.1.3. Экспериментальные животные
2.2. Материалы и методы исследований
2.2.1. Реактивы и растворы
2.2.2. Приборы и оборудование
2.2.3. Определение тепловых параметров
2.2.4. Определение агрегатов и фрагментов
2.2.5. Определение концентрации белка
2.2.6. Определение потери в массе при высушивании
2.2.7. Определение растворимости
2.2.8. Определение видоспецифичности
2.2.9. Определение прозрачности и цветности
2.2.10. Определение электрофоретической однородности
2.2.11. Определение концентрации водородных ионов (pH)
2.2.12. Определение остаточного этилового спирта

2.2.13. Определение остаточного риванола
2.2.14. Определение токсичности
2.2.15. Определение пирогенности
2.2.16. Определение специфической активности in vivo
2.2.17. Определение специфической активности in vitro
2.2.18. Определение стерильности
2.2.19. Статистические методы
Глава 3. Исследование тепловых характеристик антирабического иммуноглобулина, влияющих на процесс лиофилизации
3.1. Определение эвтектической температуры антирабического иммуноглобулина
3.2. Изучение тепловых параметров антирабического иммуноглобулина
Глава 4. Разработка технологии сублимационного высушивания гетерологичного антирабического иммуноглобулина и его Г(аЬ’)2-фрагментов
4.1. Подбор лиопротекторов и определение оптимальной рецептуры лиопротектор/препарат для получения лиофилизированной формы антирабического иммуноглобулина
4.2. Исследование влияния температурно-временных параметров лиофилизации
на качественные характеристики препарата
4.3. Расчет экономической эффективности внедрения оптимизированной
технологии лиофильного высушивания антирабического иммуноглобулина
Глава 5. Исследование свойств лиофилизатов гетерологичного
антирабического иммуноглобулина и его Г(аЬ’)2-фрагментов
5.1. Исследование молекулярно-массового состава антирабического иммуноглобулина жидкой и лиофилизированной форм
5.2. Анализ спецификационных показателей лиофилизатов антирабического иммуноглобулина и его Г(аЬ’)2-фрагментов
5.3. Изучение стабильности лиофилизатов антирабического иммуноглобулина
в процессе длительного хранения

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

тейнеры с крышкой объемом соответственно 40/25 мкл. Для исключения влияния материала тигля проводили коррекцию опытных данных на материал тигля. Сканирование проводили по составленной температурной программе, при этом на место «образец сравнения» и «образец» в калориметр помещали пустые алюминиевые тигли. Далее в измерительную ячейку на место «образец» помещали предварительно загруженные и запечатанные алюминиевые тигли с исследуемыми образцами иммуноглобулина. Образец раствора взвешивали на весах с точностью ±0,01 мг. Масса образцов для ДСК-измерений составляла от 0,63 до 1,43 мг. В измерительной ячейке пустой алюминиевый тигель оставался на месте «образец сравнения». Проводили сканирование по программе в автоматическом режиме исследуемых образцов в атмосфере аргона. Охлаждение образцов осуществляли жидким азотом. Обработку ДСК-кривых проводили по программам, входящим в комплект технического обеспечения ДСК-калориметра.
2.2.4. Определение агрегатов и фрагментов
Содержание агрегатов и фрагментов в иммуноглобулине определяли методом колоночной гель-фильтрации [102], основанном на фракционном разделении препарата в зависимости от молекулярной массы белковых компонентов. При проведении фракционирования иммуноглобулина использовали хроматографическую колонку размером 25 х 2,6 см. Молекулярный вес антирабического иммуноглобулина обусловил применение в качестве наполнителя ультрагеля трисакрил ОР 2000М с областью разделения глобулярных белков от 120 до 15 000 кДа. Объем внесения анализируемой пробы составлял 1 мл. Препарат разводили 0,9 % раствором хлорида натрия до концентрации 5 % и добавляли глицин, используемый в производстве препарата как стабилизатор, до конечной концентрации 2,25 %. Фракционирование проводили в течение 2 ч со скоростью потока 0,8 мл/мин. Величину оптической плотности каждой фракции определяли при длине волны 280 нм на проточном спектрофотометре «Увикорд 811». Запись профилей элюции