Поиск новых внутриклеточных взаимодействий белка S100A4(MTS1)

• Автор: Кошелев, Юрий Алексеевич
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 92 с. : ил.

Оглавление.
Оглавление

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Литературный обзор. ФУНКЦИИ БЕЛКА МТА4 В

НОРМАЛЬНЫХ И ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ

Связь экспрессии белка А4МТ с мстастазированисм опухолей.

Белок Б0А4МТ представитель семейства Б0

Структура гена А4 и регуляция его экспрессии.

ТканеваялокализацияА4

А4 в гладкомышечных клетках артерий

Роль А4 в прогрессии артрита.
А4 в клетках нервной ткани.
Роль А4 в ремоделировании внеклеточного матрикса.
Влияние А4 на минерализацию костной ткани
Внутриклеточные взаимодействия А4.
А4 и р.
Взаимодействие ТЦНМ ПА и А4
Другие внутриклеточные взаимодействияя А4
Заключение
Материалы и методы.
Ферменты и реактивы
Плазмидные векторы.
Штаммы бактерий.
Агарозный гельэлектрофорез ДНК.
Трансформация клеток . i с использованием СаСЬ
Трансформация клеток . i электропорацией
Выделение плазмидной ДНК
Получение поликлональной антисыворотки к белку 04.
Культивирование клеточных линий, 0 и 0
Электрофорез в ДСНПААГ.
Электроперенос белков на мембрану.
Иммуноблотинг
Выделение рекомбинантного белка 04 с помощью
металлохелатной хроматографии.
Выделение септинов 6 и 7 на i сефарозе.
Приготовление аффинного сорбента, А4сефарозы.
Очистка поликлональных антител к 0 4 на аффинном
сорбенте
Проведение аффинной хроматографии с цитоплазматической
фракцией клеточного лизата
Идентификация белков методом пептидного фингерпринта.
Аффинная хроматография с использоваЕшем i сефарозы.
Результаты и обсуждение.
Поиск новых белковмишений для 041 методом аффинной хроматографии
редпосылки. Получение аффинного сорбента .
Аффинная хроматография на 0А4сефарозе
Идентификация элюированных с аффинного сорбента белков Взаимодействие эндогенного 04 с рекомбинантными септинами 6, 7.
Свойства молекул исследуемых септинов.
Выделение рекомбинантных септинов, 6 и 7, с
использованием бицистронного вектора
Поликлональные кроличьи антитела к 04 1
Проведение аффинной хроматографии на 67i
агарозе.
Аффинная хроматография с использованием очищенных
рекомбинантных белков 04, 67
Дальнейшие перспективы
Список литературы


Оглавление. Литературный обзор. Связь экспрессии белка А4МТ с мстастазированисм опухолей. Структура гена А4 и регуляция его экспрессии. Роль А4 в прогрессии артрита. А4 в клетках нервной ткани. Роль А4 в ремоделировании внеклеточного матрикса. Внутриклеточные взаимодействия А4. А4 и р. Материалы и методы. Плазмидные векторы. Штаммы бактерий. Агарозный гельэлектрофорез ДНК. Трансформация клеток . Трансформация клеток . Получение поликлональной антисыворотки к белку 04. Электрофорез в ДСНПААГ. Электроперенос белков на мембрану. Выделение септинов 6 и 7 на i сефарозе. Приготовление аффинного сорбента, А4сефарозы. Идентификация белков методом пептидного фингерпринта. Аффинная хроматография с использоваЕшем i сефарозы. Результаты и обсуждение. Получение аффинного сорбента . Идентификация элюированных с аффинного сорбента белков Взаимодействие эндогенного 04 с рекомбинантными септинами 6, 7. Свойства молекул исследуемых септинов. Список литературы. Список сокращений. Сегодня известно, что в основе некоторых, фенотипически не похожих друг на друга патологических, изменений тканей млекопитающих, лежат нарушения в одних и тех же молекулярных механизмах и сигнальных путях. Обнаружение таких сигнальных путей помогает пролить свет на роль некоторых молекул, участие которых в развитии той или иной патологии на фенотипическом уровне было давно и достоверно показано. Один из таких примеров это белок 041, известный маркер и индуктор инвазивности опухолевых клеток. Сегодня, активно изучается его роль в развитии таких патологий, как артрит, гипертрофия миокарда, гипертрофия гладкомышечного слоя легочных артерий, почечный фиброз и др. В основе всех перечисленных патологий лежит ненормальное ремоделирование тканей в ответ на внешние воздействия, и молекулярные механизмы регуляции клеточной подвижности играют здесь не последнюю роль. Множество экспериментов достоверно показали, что белок 041 увеличивает клеточную подвижность и инвазию опухолевых клеток, но, повидимому, через те же молекулярные механизмы он может быть вовлечен в развитие указанных выше патологий, не связанных с развитием опухолей. Две наиболее, обоснованные экспериментально гипотезы о механизме влияния 04 на увеличение инвазивности клеток основаны на. Однако, обе эти гипотезы недостаточны для объяснения феномена индукции белком А4 инвазивности опухолевых клеток. К тому же, эти гипотезы не объясняют, каким образом А4МТ влияет на уровень экспрессии некоторых важных с точки зрения онкологии генов Екадгерина и ВшрЗ белок семейства Ьс На нага взгляд, для А4 существует, как минимум, еще один или несколько сигнальный путь, в котором задействованы малые ГТФазы семейств Сбс и Яас1, или другие белки. В настоящей работе мы попытались выявить новые внутриклеточные взаимодействия белка А4МТ, которые могли бы пролить свет на его роль в указанных выше явлениях на молекулярном уровне. Обнаружить и идентифицировать белки, способные селективно связываться с данным аффинным сорбентом в физиологических условиях.