Роль Gypsy инсулятора в процессах трансвекции у Drosophila melanogaster

• Автор: Кравченко, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 91 с. : ил.

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 .Трансвекция в локусе

2.2. Трансвекция в локусах и i

2.3. Трансвекция в локусе ii

2.4. Трансвекция в локусе i

2.5. Трансвекция в локусе i, роль белка в процессах трансвекции

2.6. Трансвекция в локусе

2.7. Визуализация трансвзаимодействий

2.8. Роль соматического спаривания гомологичных хромосом в трансвекции

2.9. инсулятор i

2 Дальние взаимодействия между энхансерами и промоторами
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Генетические методы
3.1.1. Линии и мутации i , использованные в работе
3.1.2. Трансформация эмбрионов i и
получение трансгенных линий
3.1.3. Фенотипический анализ экспрессии гсиов и iii
в трансгенных линиях
3.1.4. Генетические скрещивания
3.2. Биохимические методы
3.2.1. Выделение ДНК из дрозофилы
3.2.2. Амплификация ДНК
3.2.3. Саузернблотанализ
3.2.4. Секвенирование плазмид и ПЦР продуктов
3.2.5. Молекулярное клонирование
3.2.6. Трансформация бактериальных клеток плазмидами
3.2.7.а Выделение плазмидной ДНК методом щелочного лизиса 3.2.7.6 Выделение плазмидной ДНК в больших количествах методом
щелочного лизиса
3.2.8. Локализация места инсерции конструкции в геном
3.2.9. Иммуноокрашивание политенных хромосом i 3.2I i флуоресцентная гибридизация
3.2. .Создание конструкций
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1.1 Уровень трансактивации энхансерами гена промотора гена
в значительной степени зависит от места в геноме . и не коррелирует с уровнем цисактивации
4.1.2. инсулятор способствует трансактивации промотора гена
4.1.3. инсулятор улучшает трансвекцию между энхансерами и промотором гена , расположенными в негомологичных локусах генома i
4.1.4. Наличие инсуляторов на обеих гомологичных хромосомах необходимо для эффективной трансактивации
гена
4.1.5. инсулятор позволяет энхансерам активировать промотор гена , расположенный на гомологичной хромосоме
4.2. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ


Выделение плазмидной ДНК методом щелочного лизиса 3. Иммуноокрашивание политенных хромосом i 3. В основе понимания целостной картины регуляции экспрессии генов лежит ответ на вопрос, каким образом регулируется транскрипция. Регуляторные последовательности, такие как промоторы, энхансеры и инсуляторы, являются элементами, которые контролируют транскрипцию в пространстве и времени. Энхансеры способны активировать транскрипцию с промотора генамишени независимо от их ориентации и расстояния до точки начала транскрипции. Некоторые энхансеры могут быть расположены на расстоянии около 0 КЬ и более от промоторамишени i . Хорошо известно, что на уровень экспрессии многих генов также оказывает влияние присутствие иисуляторов. Инсуляторы класс регуляторных элементов, которые обладают следующими свойствами см. При этом энхансср, изолированный от одного промотора инсулятором, тем не менее, способен активировать другой, неизолированный промотор i vi . Было показано vv . Однако свойства инсуляторов и модели их действия описаны на системах, состоящих из цисрасположенных элементов. Возможно, инсуляторы способны оказывать влияние и на процессы, в которых принимают участие трансрасположенные элементы. Рис. Свойства инсуляторов. А инсулятор блокирует взаимодействие между энхансером и промотором, если находится между ними. В энхансср, изолированный от промотора инсулятором, способен активировать другой, неизолированный промотор. С инсуляторы способны защищать ограниченный ими ген от репрессирующего действия окружающего хроматина. Для изучения регуляции генов хорошей моделью являются системы, содержащие все три класса основных регуляторных элементов. К ним можно отнести системы, позволяющие смоделировать эффекты трансвекции, поскольку молекулярный механизм трансвекции напоминает способ действия энхансера, далеко отстоящего от промотора. Спаривание гомологичных хромосом процесс, который наблюдается в мейозе у всех эукариот. У большинства организмов он ограничен профазой мейоза клеток зародышевой линии, но у й1р1ега спаривание гомологичных хромосом наблюдается и в соматических интерфазных клетках рис. Для ряда локусов было обнаружено, что их спаривание оказывает значительное влияние на экспрессию генов. Этот феномен был назван трансвекция влияние гомологичных аллелей на функционирование друг друга. Рис. Впервые трансвекция была описана i в году для гена ix i , ответственного за формирование 5 и 6 парасегментов тела дрозофилы. В настоящий момент явление трансвекции описано для ряда генов i , в том числе генов , i, vii, генов ix комплекса и др.