Молекулярно-генетический анализ факторов риска развития бокового амиотрофического склероза

• Автор: Кондратьева, Екатерина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 106 с. : ил

Оглавление

Список сокращений

Введение.

Обзор литературы

1. Клиническая характеристика и эпидемиология бокового амиотрофического склероза.

2. Особенности семейной формы бокового амиотрофического склероза.

3. Современные представления об этиопатогенезе бокового амиотрофического склероза.

1. Оксидантный стресс как основной этиопатогенетический механизм развития бокового амиотрофического склероза

2. Эксайтотоксичнцсть

3. Нейрофиламенты и развитие БАС.

4. БАС как инфекционное заболевание

5. Аутоиммунная гипотеза патогенеза БАС
6. Генетические факторы риска развития бокового амиотрофического склероза.
6.1. Ген медь цинк зависимой супероксиддисмутазы
6.1.1. Общая характеристика .
6.1.2.Мутация ОА.
6.1.3. Мутации БОО и развитие оксидантного стреса.
6.2. Ген марганец зависимой супероксид дисмутазы.
6.3. Гены системы детоксикации глутатионБтрансферазы типов Т1 и М1.
6.4. Генетические дефекты цитоскелета мотонейронов.
Материалы и методы
I. Общая характеристика больных
II. Молеулярно генетические методы исследования.
1. Выделение ДНК из клеток крови человека.
2. Постановка полимеразной цепной реакции ПЦР.
3. Введение радиоактивной метки в праймеры для ПЦР амплификации
4. Электрофорез в полиакриламидном геле.
4.1. Исходные растворы для проведения электрофореза.
4.2. анализ
4.3. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
4.4. Рестрикционный анализ фрагментов гена 1.
4.5. Анализ полиморфизма генов глутатионЗтрансфераз Т1 и
4.6. Анализ полиморфизма гена тяжелой цепи нейрофиламентов.
4.7. Анализ гаплотипов по полиморфным маркерам, тесно сцепленным с геном 1.
III. Статистическая обработка результатов.
Результаты и обсуждение.
1. Общая характеристика больных.
2. Анализ гена 1.
3. Анализ полиморфизма сигнальной последовательности 2.
4. Анализ полиморфных маркеров генов глутатион8трансфераз и
5. Анализ полиморфизма гена тяжелой цепи нейрофиламентов
Заключение
Список литературы


Актуальность изучения молекулярных основ мультифакториальных неврологических заболеваний связана с высокой частотой их встречаемости, тяжелым течением, сопровождающимся инвалидизацией и приводящим в большинстве случаев к фатальному исходу . Одно из таких заболеваний боковой амиотрофический склероз БАС. Это нейродегенеративное заболевание, которое сопровождается избирательной гибелью мотонейронов головного и спинного мозга. Распространнность БАС в мире составляет 370 тыс. В большинстве случаев боковой амиотрофический склероз представляет собой спорадическое заболевание мультифакториальной этиологии. У 5 больных, однако может выявляться положительный семейный анамнез . Ранее, при изучении факторов риска БАС, большое значение придавали образу жизни пациента, воздействию вирусных агентов, аутоиммунным процессам и др. Однако, наличие семейных форм БАС и клинической гетерогенности внутри одной родословной свидетельствуют о вовлеченности генетических факторов в развитие заболевания. В г. и коллектив исследователей показали, что, примерно четверть семейных случаев БАС связана с мутациями гена медьцинк зависимой супероксиддисмутазы 1 3. При спорадической БАС мутации 1 встречаются у 57 больных. Однако для большинства случаев БАС, которые в основном представлены спорадическими формами, роль генетических факторов в развитии заболевания остается неизвестна. Предполагается наличие генетически обусловленного нейротоксического фактора, или, скорее, комбинации факторов, которые специфически воздействуют на мотонейроны. Согласно данным литературы, существует несколько основных гипотез развития БАС. Это оксидантный стресс, эксайтотоксичность, нарушение процессов детоксикации, механизма аксонального транспорта и структуры цитоскелета мотонейронов, воздействие вирусов, иммунные нарушения и др . В настоящее время одним из важнейших звеньев патогенеза заболевания считают оксидантный стресс . В связи с этим, особый интерес представляют гены, продукты которых участвуют в сложном обмене активных форм кислорода в клетке. В первую очередь к ним относятся гены, кодирующие ферменты супероксиддисмутазы медьцинк зависимую супероксиддисмутазу, локализованную в цитоплазме и марганец зависимую супероксиддисмутазу, локализованную в митохондриях . Детоксикация ксенобиотиков является одним из ключевых метаболических процессов в организме. Важная роль в процессах детоксикации принадлежит ферментам глутатион Б трансферазам Т1 и М1 . При БАС страдает система аксонального транспорта и трофики мотонейронов, в связи с чем особый интерес представляют гены, кодирующие цитоскелетные белки, в частности белки нейрофиламентов . На данном этапе изучения роли генетической составляющей в патогенезе бокового амиотрофического склероза одним из значимых методов является анализ генетических ассоциаций исследование полиморфизма в генах кандидатах и его связи с заболеванием. Такие исследования дают возможность установить вовлеченность в патогенез заболевания конкретных геновкандидатов и на основе этого в дальнейшем выявить группы лиц с риском развития БАС 3. Изучение молекулярногенетических маркеров антиоксидантной системы, системы детоксикации и цитоскелетных белков мотонейрона при БАС и оценка возможностей использования этих маркеров в качестве критериев риска развития и прогноза течения заболевания. Провести поиск мутаций в кодирующей области и участках экзон интронных соединений гена медьцинк зависимой супероксиддисмутазы у больных спорадическим БАС. Провести анализ гаплотипов по полиморфным маркерам, тесно сцепленных с геном 1. Провести анализ А9Vполиморфизма сигнальной последовательности митохондриальной супероксиддисмутазы. . Провести анализ полиморфизма гена тяжлой цепи нейрофиламентов. Провести анализ ассоциации полиморфных вариантов изученных генов с основными клиническими характеристиками заболевания возрастом и вариантом начала, типом прогрессирования. Впервые в группе больных боковым амиотрофическим склерозом из России проведен комплексный молекулярногенетический анализ ряда генов, предположительно вовлеченных в патогенез заболевания.