Механизмы активации транскрипции, осуществляемой РНК-полимеразой II

• Автор: Набирочкина, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 228 с. : ил.

1. Транскрипция у эукариот. РР1Кполимеразы

2. РНКполимеразы

3. Области контроля транскрипции.

4. Инициация транскрипции РНКполимеразой II.

II. ТРАНСКРИПЦИОННЫЕ ФАКТОРЫ

1 .Компоненты транскрипционного аппарата.

2. Общие факторы транскрипции

3. Активаторы и рспрессоры.

4. Корегуляторы транскрипции.

III ХРОМАТИН.

1. Участие хроматина в процессе транскрипции.

2. Гетерохроматин и эухроматин
3. Хроматинремодслирующис комплексы
4. Комплексы, модифицирующие хроматин.
5. Взаимодействие хроматинремоделирущих и модифицирующих комплексов IV. ПРИНЦИПЫ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ АППАРАТА ИНИЦИАЦИИ ТРАНСКРИПЦИИ РНКПОЛИМЕРАЗЫ II.
1. Стадии транскрипции. Модель последовательной сборки Р1С.
2. Модульная структура транскрипционного аппарата
.
3.Комбинаторная модель регуляции транскрипции. Синергизм действия и контекстзависимая активность факторов транскрипции
4. Регуляция транскрипции
5. Регуляция активности транскрипционных факторов
6. Репрессия транскрипции
7. Инициация транскрипции i viv
8. Организация ядра и транскрипция.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
I. Объекты и задачи исследования.
И. Материалы и методы
1. Реактивы.
2. Работа с линиями i .
3. Программное обеспечение. Базы данных.
4. Работа с ДНК.
5. Работа с РНК
6. Работа с белками
7. Гибридизация i i и иммуноокрашивание
8. Эксперименты в двугибридной системе дрожжей
9. Работа с культурами клеток.
III. РЕЗУЛЬТАТЫ
III. 1. Характеристика гена 9, его мутантных аллелей и белка,
кодируемого этим геном
Клонирование гена еу1 и создание нового метода клонирования генов i , маркированных высоко копийным мобильным
элементом.
Изучение структуры гена еу
Характеристика экспрессии геноа еу1 и 4 у .
Изучение молекулярной природы мутации еу1и
Фенотипические проявления мутации еу
Исследование последствий инактивации транскрипции гена
Изучение влияния аминокислот С конца белка 9 активацию
транскрипции гена i viv.
Изучение влияния мутации еу1и на действие энхансеров гена
Исследование участия 9 в энхансерпромоторных взаимодействиях
1.2. Изучение комплекса .
Введение


В настоящее время найдены элементы, расположенные в промежуточных положениях. Для многих проксимальных и дистальных элементов показана тканеспецифичиость действия i , . Энхансерами называют определенный класс регуляторных последовательностей от до 0 п. ДНК с промотора, находящегося на большом расстоянии от него от т. Энхансеры представляют собой протяженные последовательности нуклеотидов, которые содержат сайты связывания нескольких факторов транскрипции энхансеров Энхансеры оказывают действие независимо от их ориентации по отношению к промотору, а также от расположения относительно регулируемого гена. Аналогичным образом действуют сайленсеры регуляторные элементы, которые оказывают негативное влияние на процесс инициации транскрипции. Обычно каждый ген многоклеточных организмов контролируется несколькими энхансерами. Типичный энхансер в геноме животных представляет собой участок, состоящий из п. Необходимо отметить, что несколько энхансеров одного гена действуют независимо друг от друга vi i, . Энхансеры являются своеобразными матрицами для сборки сложных белковых комплексов из активаторов репрессоров, компонентов рсмоделирующих комплексов и белков хроматина. Эти комплексы посредством высокоспецифичных белокбелковых взаимодействий осуществляют передачу регуляторных сигналов РНКполимеразе, входящей в состав I, и тем самым регулируют транскрипцию генов. Энхансеры соединяются в ядре с промотором благодаря образованию петли, образованной разделяющей их ДНК Патрушев, , . Сайленсеры, повидимому, запускают сборку гетерохроматинподобных структур на контролируемых ими генах. Такой механизм показан у дрожжей для локуса, ответственного за тип спаривания. У высших организмов, вероятно, существуют и другие механизмы , . Пограничные элементы. В ряде случаев показано, что целый набор генов может находиться под контролем не только указанных выше элементов, но и так называемого сайта, контролирующего структуру хроматина и доступ активаторов к ДНК на протяженном участке до 0 т. Как было выявлено в модельных системах, общими свойствами различных являются 1 обеспечение высокою уровня активированной экспрессии связанным с ними генам 2 усиление действия с увеличением количества копий 3 перевод хроматина в открытое состояние на протяженных участках ДНК 4 обеспечение экспрессии контролируемых генов независимо от окружающего гетерохроматина. Часть свойств напоминает свойства энхансеров тканеспецифичность действия, способность связывать факторы транскрипции. Однако эти два типа последовательностей четко различаются. Последовательности, контролирующие транскрипцию энхансеры, , могут оказывать свое действие на больших расстояниях. Элементами, ограничивающими их влияние на определенный набор генов, являются инсуляторы пограничные элементы и . Инсулятор, расположенный между энхансером и промотором, блокирует их взаимодействие. В геноме обычно требуется наличие двух инсуляторов, ограничивающих активно транскрибируемую область. Существует несколько моделей действия инсуляторов они либо разобщают энхансер и промотор, либо контролируют состояние хроматина в определенной области. Известны транскрипционные факторы, связывающиеся с инсуляторами например, , , . Кроме того, инсуляторы часто находятся на границе гетеро и эухроматина. Предполагают, что ДНК между образует петлю, которая представляет собой отдельно регулируемый домен. Конкретные функции в транскрипции неизвестны в некоторых случаях они проявляют свойства инсуляторов или . Поиск белков, обеспечивающих разграничение доменов с активной и подавленной транскрипции в ядрах дрожжей, выявил компоненты следующих комплексов I, I, 3, 4, , II, медиатор и другие. Вероятно, все эти комплексы вносят свой вклад в создание барьеров между активированными и репрессированными доменами i , . Таким образом, транскрипционные факторы обеспечивают как транскрипцию в отдельных доменах, так и формирование их границ. Вместе с указанными пограничными элементами факторы транскрипции оказывают влияние на высшие структуры хроматина , .