Новые аспекты эффекта положения трансгенов Drosophila melanogaster

• Автор: Силичева, Маргарита Александровна
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 93 с. : ил.

Трансформация эмбрионов i и получение трансгенньгх

5. Приготовление компетентных клеток и трансформация. ДНК. Рестрикция, лигирование, переосаждение ДИК, гельэлектрофорез. Транскрипция является одним из важнейших этапов реализации генетической информации. Транскрипция эукариот регулируется многочисленными цис и трансфакторами, соответственно, регуляторными последовательностями и белками, которые осуществляют взаимодействие между дальними энхансерами, сайленсерами и ближними проксимальный промотор, коровый промотор регуляторными элементами. Для правильной работа гена необходимо, чтобы на промотор гена воздействовали только свои регуляторные последовательности. Однако регуляторные последовательности не являются абсолютно специфичными. Энхансеры могут активировать не только свой промотор хотя специальные последовательностикоммуникаторы сильно повышают специфичность энхансера, но и другие доступные промоторы. Это может нарушать правильную регуляцию генов. Отчасти эту проблему помогают решить инсуляторы последовательности, препятствующие взаимодействию промотора с энхансером. Предполагается, что они способны взаимодействовать друг с другом, образуя независимые транскрипционные домены . Нсспецифичностыо регуляторных элементов в значительной степени объясняется эффект положения различный уровень экспрессии гена в разном нуклеотидном окружении. Эффект положения наблюдается как при хромосомных перестройках, так и у трансгенов. Неизвестно, препятствует ли взаимодействие двух инсуляторов и как следствие, образование независимого транскрипционного домена элонгации транскрипции, которая началась за пределами домена. В первой части данной работы мы исследовали вклад эндогенной транскрипции, проходящей через трансген на примере гена iii, лишенного промотора, а также вклад транскрипции в общий эффект положения на примере гена iii, содержащего функциональный промотор. Мы изучили влияние терминаторов на эффект положения на примере вирусного терминатора транскрипции V, а также влияние инсуляторов на примере инсулятора . Во второй части данной работы мы исследовали влияние эффекта положения на свойства регуляторной последовательности . Последовательность является частью регуляторной области i генного комплекса. В нашей лаборатории были получены данные о том, что эта последовательность, будучи перемещена при инверсии в район регуляторных элементов гена нарушает работу и гена и генов локуса. Мы исследовали свойства последовательности в разных трансгенных системах. ЕпНи. Изучение влияния эндогенной транскрипции на эффект положения трансгенного гена ттЫ Ы1е в отсутствие промотора. Изучение вклада эндогенной транскрипции в эффект положения гена тМыИИе, содержащего функциональный промотор. Изучение влияния терминатора транскрипции 8У и инсулятора 8иН на эффект положения лишенного промотора гена тпйvi и гена тШхуЬНе, содержащег о функциональный промотор. Изучение влияния эффекта положения на свойства последовательности ЕпНи в различных трансгенных системах.