Влияние лимфоидспецифического гена pub на рост и дифференцировку эмбриональных стволовых клеток мыши

• Автор: Новосадова, Екатерина Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.00.25, 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 с. : ил.

Ранее в отделе вирусной и клеточной молекулярной генетики Института молекулярной генетики РАН с помощью метода вычитающей гибридизации были получены и охарактеризованы клоны кДНК повышенно транскрибирующиеся в ВИЧассоциированных иммунобластных лимфомах 1. Анализ этих кДНК позволил выявить среди них, наряду с уже охарактеризованными генами , i и т. ДНК с неизвестными функциями. Одним из таких лимфоидспецифичных генов, был ген нуклеотидная последовательность кДНК которого содержалась в базе данных генома человека под названием КЛАЛО 9. Японскими учеными было проведено исследование мышиного гомолога гена человека I, которому они дали название . Показано, что белковый продукт этого гена К1АА человека имеет высокую степень гомологии с мышиным белком 2. I ii i белков 2, для которых характерно наличие так называемого I или мотива, состоящего из трх цинксвязывающих доменов , ВЬох 1 В1 и ВЬох 2 В2, сопровождаемых ii СС регионом 3. На данный момент известно представителей данного семейства белков 3. Некоторые из них вовлечены в такие биологические процессы, как регуляция транскрипции, организация цитоскелета, контроль клеточной пролиферации и дифференцировки 4. Функции гена не изучены. Однако известно, что его мышиный гомолог играет важную роль в процессах клеточной дифференцировки и оказывает существенное влияние на транскрипционную активность фактора . Вклеток в ходе гемапоэза, контролирует функциональную активность нейтрофилов 5. Влияние генов и на более ранние стадии развития организма до настоящего времени исследовано не было. В данной работе для изучения влияния генов и на начальные этапы эмбрионального развития использовали модель эмбриональных стволовых клеток. Эмбриональные стволовые клетки ЭС клетки представляют собой уникальную модель для изучения процессов, лежащих в основе онтогенеза. Как и в ходе развития зародыша i viv, ЭС клетки в культуре способны давать начало всем трм зародышевым слоям энтодерме, мезодерме и эктодерме, а, соответственно, и всем развивающимся из них типам клеток. Исследования дифференцировки ЭС клеток в том или ином направлении в ответ на воздействие специфических индукторов факторов роста, цитокинов или на непосредственную генетическую модификацию позволяют приблизиться к пониманию функции исследуемых веществ и генов в данном процессе. Есть данные о том, что гены некоторых членов I семейства белков в случае рекомбинации с некоторыми другими генами приобретают свойства онкогена 4. Нами проведены эксперименты с целью изучения влияния повышенной и пониженной экспрессии гена на пролиферацию и дифференцировку ЭС клеток мыши i vi по трм зародышевым слоям энтодерме, мезодерме и эктодерме. Произведена оценка онкогенного потенциала лимфоидспецифичного гена первичных фибробластов эмбрионов крысы. Целью работы было изучение влияния лимфомоспецифического гена на рост и дифференцировку эмбриональных стволовых клеток мыши i vi и оценка онкогенного потенциала данного гена. Оценить онкогенный потенциал гена человека на культуре псевдонормальньтх клеток крысы линии 2. Глава 1. В последние годы предметом интенсивного изучения стали эмбриональные стволовые клетки ЭС клетки млекопитающих. ЭС клетки способны дифференцироваться i vi во множество эмбриональных типов клеток и множество клеток взрослого организма, производных всех трех зародышевых листков, включая клетки скелетных мышц и сердца, гемопоэтические клеткипредшественники, клетки желточного мешка, гладкомышечные клетки, адипоциты, хондроциты, эндотелиальные клетки, меланоциты, нейроны и клетки глии, островковые клетки поджелудочной железы и примитивную эндодерму 6,7,8. Относительно недавно было показано, что ЭС клетки могут образовывать половые герминальные клетки 9,,. Благодаря практически неограниченной плюрипотентности ЭС клетки признаны удобной модельной системой для изучения механизмов, лежащих в основе ранних стадий развития млекопитающих ,. Культивирование ЭС клеток позволяет также использовать их в качестве тестсистемы для оценки влияния различных цитокинов и факторов роста на процессы клеточной дифференцировки ,.