Активация транскрипционных факторов STAT, индуцированная активными формами кислорода

• Автор: Гончар, Илья Васильевич
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 129 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1.Эпидермальный фактор роста и его рецептор.

2.2. Фосфорилирование рецептора ЭФР

и его тирозинкиназная активность.

2.3. Пути передачи сигнала с рецептора ЭФР

2.4. путь передачи сигнала.

2.5. Транскрипционные факторы 1 и 3.

2.6. Механизм активации 1 и 3 под действием ЭФР.
2.7. Лиганднезависимая активация рецептора.
2.8. Роль АФК в активации рецептора ЭФР и факторов .
2.8.1. Системы генерации АФК и поддержания внутриклеточного
окислительновосстановительного баланса.
2.8.2. Роль внутриклеточных АФК в процессе
активации рецептора ЭФР и факторов .
2.8.3. Активация рецептора ЭФР и факторов
под действием экзогенных АФК
2.9. Активация нерецепторных тирозинкиназ под действием АФК
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1. Клеточные линии
3.2. Обработка клеток ингибиторами
3.3. Стимуляция клеток и приготовление
тотальных клеточных лизатов
3.4. Иммунопреципитация.
3.5. Электрофорез и иммуноблоттинг
3.6. Антитела.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ.
4.1. Динамика Н2зависимого фосфорилирования
рецептора ЭФР и факторов 1 и 3.
4.2. Участие рецепторной тирозинкиназы в процессе НгОгиндуцированной активации рецептора ЭФР
и факторов 1 и 3.
4.3. Участие тирозинкиназ семейства в процессе
активации рецептора ЭФР и факторов 1 и 3.
4.4. Изучение роли тирозинкиназы 2 в активации
рецептора ЭФР и факторов 1 и 3.
4.5. Изучение влияния окислительновосстановительного статуса клетки на уровень активации рецептора ЭФР
и факторов
4.6. Роль внутриклеточно генерируемых АФК
в активации рецептора ЭФР и факторов
5. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


опосредует АФКзависимую трансактивацию рецептора ЭФР . . ii . Исследования на опухолевых клетках выявили зависимость конститутивной активации 3 от активности киназ и 2 i . Эти факты позволяют рассматривать киназы семейства и киназу 2 в качестве основных кандидатов на роль посредников в активации рецептора ЭФР и факторов под действием Н2Ог. Важным фактором в модуляции активности тирозинкиназных каскадов является внутриклеточный окислительновосстановительный статус. Известно, что генерируемые клеткой АФК окисляют группы цистеина, необходимые для функционирования компонентов восстановительного буфера клетки глутатиона и тиоредоксина и для ферментативной активности тирозинфосфатаз. ЭФР . С другой стороны, обратимая активация фосфатаз зависит от уровня внутриклеточных антиоксидантов и блокирования в клетке систем генерации АФК. Существует несколько работ, в которых исследовано влияние антиоксиданта ацетилцистеина, предшественника глутатиона в его ферментативном синтезе, на лигандзависимую активацию рецептора ЭФР . ii . Зависимость активации сигнальных путей с участием факторов от восстановительных свойств цитоплазмы была изучена в клетках разных типов i . i . i . i . Однако в эпителиальных клетках влияние окислительновосстановительного баланса на ЭФРиндуцируемую активацию белков до сих пор не исследовано. В связи со всем сказанным выше, в настоящей работе представлялось актуальным изучить механизмы, регулирующие проведение клеточного сигнала в условиях окислительного стресса на примере рецептора ЭФР и транскрипционных факторов 1 и 3. Эпидермальный фактор роста и его рецептор. Передача сигнала с клеточных рецепторов на геном представляет собой одну из наиболее актуальных и интенсивно развивающихся областей клеточной и молекулярной биологии. Известны десятки факторов роста и разнообразных цитокинов интерферонов, интерлейкинов и т. Большую роль в развитии этой области сыграли исследования рецепторов ростовых факторов, на примере которых были впервые показаны многие молекулярные механизмы передачи сигнала в клетке. Большая группа факторов роста действует на клетки через специфические мембранные рецепторы, обладающие тирозинкиназной ТК активностью, которая является наиболее существенной для проведения сигнала в клетку i, i, . В эту группу входят инсулин, фактор роста, выделяемый тромбоцитами , фактор роста фибробластов эпидермальный фактор роста ЭФР. Наиболее исследованы сигнальные пути, запускаемые ЭФР, который регулирует пролиферацию и дифференцировку различных типов тканей. Нарушения регуляции этих путей являются причиной возникновения и прогрессии многих онкозаболеваний , , . ЭФР был впервые выделен Коэном из гомогената подчелюстных желез мыши , . Он обнаружил, что ЭФР оказывает стимулирующее действие на эпидермальные ткани, вызывая преждевременное открывание глаз и прорезывание зубов у новорожденных мышей. Установлена аминокислотная последовательность ЭФР мыши, крысы и человека v, , . ЭФР мыши одноцепочечный полипептид, который состоит из аминокислотных остатков АО и имеет молекулярную массу Да. Эта молекула представляет собой глобулярную структуру, стабилизированную тремя дисульфидными мостиками Мауо, . Ее характерной особенностью является полное отсутствие аланина, фенилаланина и лизина, наличие двух триптофанов, а также высокое содержание тирозина. К семейству ЭФР принадлежит, по крайней мере, 8 различных гормонов сам ЭФР, , , амфирегулин, эпирегулин, бетацелулин, неорегулины и глиальный фактор роста i, , . Большинство белков этого семейства синтезируются как трансмембранные предшественники, которые могут образовывать растворимую форму после протеолиза или функционировать в мембране. Они состоят всего из АО и имеют общий домен, который необходим и достаточен для связывания с рецептором .