Влияние разных изоформ ламинина на адгезию и миграцию нормальных и трансформированных кератиноцитов человека

• Автор: Калмыкова, Наталья Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 124 с. : ил.

Оглавление
Введение

Цели и задачи исследования

Положения, выносимые на защиту

Обзор литературы

1. Гистологическое строение кожи

2. Диференнировка кератиноцитов

3. Базальная мембрана кожи человека

4. Рецепторы кератиноцитов к элементам БМ кожи

5. Ламинин

5.1. Строение и изоформы ламинина

5.2. Организация ламининов в БМ кожи человека
5.3. Появление ламинина в эмбриогенезе
5.4. Ламинин24
5.5. Рецепторы ламинина
6. Раневое заживление кожи
II Миграция клеток
1. Молекулярные механизмы миграции
2. Факторы, влияющие на миграцию кератиноцитов
2.1. Внеклеточный матрикс
2.2. Матриксные металлопротеиназы
2.3. Ростовые факторы
Материалы и методы
Результаты
1. Изучение адгезии нормальных и трансформированных кератиноцитов к иммобилизованным на субстрате ламинину1 и ламинину24
2. Адгезия с предварительной обработкой клеток ламининами
3. Определение миграционной активности клеток, связанных друг с другом межклеточными контактами
4. Определение миграционной активности одиночных клеток на различных субстратах
5. Изучение вклада интегринов, содержащих р4 и р1 субъединицы, и
неинтегринового рецептора кДа во взаимодействие клеток с ламинином24 в процессе адгезии
6. Изучение вклада интегриновых рецепторов, содержащих р4 и рсубъединицы во взаимодействие клеток с ламинином24
7.0предсленис участия ММП в процессе миграции клеток линии А1 на ламинине24 под действием ЭФР
Обсуждение
Выводы
Список литерату


Элеидин не окрашивается красителями, но хорошо преломляет свет, благодаря этому весь слой представляется в виде блестящей полоски. Самый поверхностный, роговой слой состоит из многих слоев ороговевших клеток роговых чешуек. Чешуйки содержат роговое вещество кератин, который богат серой и устойчив к различным химическим агентам. Дерма делится на 2 слоя сосочковый и сетчатый, которые не имеют четкой границы. Сосочковый слой располагается непосредственно под эпидермисом и состоит из рыхлой соединительной ткани. Свое название этот слой получил от многочисленных сосочков, вдающихся в эпидермис. Внеклеточный матрикс состоит из коллагеновых, эластических волокон. Сетчатый слой, обеспечивающий прочность, образован плотной соединительной тканью с мощными пучками коллагеновых волокон и сетью эластических волокон. Пучки коллагеновых волокон проходят в двух направлениях одни лежат параллельно поверхности кожи, другие под углом. Вместе они образуют сеть, строение которой определяется функциональной нагрузкой на кожу. Клетки дермы представлены, в основном, фибробластами. Также встречаются макрофага, тканевые базофилы и гладкомышечные клетки. Кожа относится к тканям, которые находятся в состоянии постоянного обновления. Так как верхние слои кожи роговые чешуйки постоянно слущиваются, то для поддержания постоянства слоев эпидермиса клетки нижнего базального слоя должны активно делиться. Клетки базального слоя имеют ряд характеристик, которые отличают их от клеток других слоев. Только клетки этого слоя способны к митозу и синтезу ДНК , . Клетки базального слоя имеют интегриновые рецепторы 6 , . Кератиноциты базального слоя синтезируют особую пару кератинов К и К5. Клетки шиповатого слоя содержат уже другую пару кератинов К1 и К , , . Клетки этих слоев к митозу уже не способны, но синтетические процессы в них еще идут. В кератиноцитах начинается синтез лизинбогатого белка будущей роговой оболочки инволюкрина. Сначала он накапливается в цитоплазме, но затем концентрируется по периферии клеток. , . Одним из фундаментальных нерешенных вопросов терминальной диффсрснцировки ксратиноцитов остается вопрос о том, когда клетки становятся комитированы к дифференцировке перед тем как покидают базальный слой или после Чем определяется судьба клеток их программой или внешними факторами В число внешних факторов входят элементы БМ, с которой клетки находятся в непосредственном контакте. Было замечено, что при нарушении контакта с БМ клетки начинают дифференцироваться , , . Существует обратная связь между степенью распластанности клеток и уровнем экспрессии инволюкрина , . Стимулом дифференцировки могла быть пропорция рецепторов, вовлеченных в связь с лигандом. В поддержку последнего предположения говорили результаты еще одного опыта при добавлении фибронектина к суспензионной культуре, когда все клетки круглые, диффсрснцировки не происходило ,, . Подобные факты дали основание выдвинуть гипотезу о пассивной дифференцировке в терминальную дифференцировку уходят те кератиноциты, которые выталкиваются из базального слоя, и потеря связи с БМ запускает каскад событий, приводящих к терминальной дифференцировке. По есть данные, которые противоречат этой гипотезе. Начало синтеза инволюкрина не совпадает с переходом кератиноцитов в супрабазалыюе положение. И в монослойной культуре ксратиноцитов приблизительно базальных кератиноцитов содержат инволюкрин , . Таким образом, переход в вышележащие слои, скорее всего, является не причиной, а следствием дифференцировки. Этот переход происходит в результате изменения адгезии кератиноцитов. Уменьшение адгезивности клеток приводит к тому, что они выталкиваются из базального слоя. При чешуйчатой карциноме несколько слоев клеток имеют характеристики базальных кератиноцитов , . Если кератиноциты становятся комитированы к дифференцировке до перехода в супрабазалыюе положение, то клетки базального слоя должны быть гетерогенны.