Неканонические функции факторов терминации трансляции eRF1 и eRF3 у дрожжей saccharomyces cerevisiae

• Автор: Валуев, Игорь Александрович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 173 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ФАКТОРЫ ТРАНСЛЯЦИИ И ЦИТОСКЕЛЕТ

1. Факторы терминации трансляции эукариот

1.1. Сравнительная характеристика терминации трансляции у ЕиЬас1спа, АгсЬеЬасгепа и Еикагуа

1.2. еЦЕ1 эукариотический фактор терминации трансляции класса I

1.3. еЦЕЗ эукариотический фактор терминации трансляции класса II.

1.4. Дополнительные факторы, принимающие участие в терминации трансляции у эукариот.

2. Особенности организации цитоскелета у дрожжей.

2.1. Тубулиновый цитоскелет

2.2. Актиновый цитоскелет
3. Взаимодействие факторов трансляции и компонентов цитоскелста .
3.1. Факторы инициации трансляции и цитоскелет.
3.2. Факторы элонгации трансляции и цитоскслет.
3.3. Факторы терминации трансляции и цитоскслет
4. Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
I. Штаммы, среды, условия культивирования и генетические методы .
2. Плазмиды, генноинженерные манипуляции и трансформация
3. Клонирование мультикопийных супрессоров температурочувствительных мутаций
4. Белковый гсльэлектрофорсз и иммуноблоттинг
5. Гельфильтрация
6. Коиммунопреципитация.
7. Определение эффективности сквозного прочтения нонсенскодонов .
8. Проточная цитофлуориметрия.
9. Флуоресцентная микроскопия.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Создание системы для изучения фенотипических последствий репрессии генов ЗиР и 5Р
2. Уменьшение количества одного из факторов терминации трансляции сопровождается снижением уровня другого фактора.
3. Репрессия генов 1Р и 5С5 стимулирует сквозное прочтение нонсенскодонов.
4. Уменьшение количества еКГЗС приводит к изменинениям морфологии
клеток.
5. Уменьшение количества еЮ1 приводит к нарушению клеточного цикла.
6. Снижение уровня еЯИЗС нарушает деление и расхождение ядер в митозе
7. Уменьшение количества 3 вызывает нарушение морфологии веретена деления
8. Уменьшение количества 3 вызывает деполимеризацию актина .
9. и 3 могут входить в состав альтернативных белковых комплексов.
. Ген 1 в мультикопийном состоянии супрессирует некоторые температурочувствительные мутации в гене
. Взаимодействие и iр в лизатах клеток.
. Сверхэкспрессия I стимулирует индукцию I v
. Сверхэкспрессия I не влияет на эффективность терминации трансляции.
. Сверхэкспрессия I супрессирует нарушения цитокинеза, вызываемые мутацией i
. Мутация i6 нарушает нормальную локализацию
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
1. домен 3 ингибирует эффективность терминации трансляции .
2. и 3 одинаково важны для осуществления терминации трансляции i viv.
3. Факторы и 3 дрожжей имеют нетрансляционные функции
4. 3 и цитоскелет.
5. и клеточный цикл
6. Комплекс возможная роль в клетке
7. Заключение.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В отличие от 3, 3 является жизненно важным белком iv . i , i, . Ни , ни 3 не гомологичны соответствующим факторам эубактерий. Более того, в то время как 3 обладает структурным сходством с . . . И наконец, никакого гомолога эубактериального у эукариот не обнаружено. Предполагается, что функцию может выполнять 3 i . Что касается архебактерий, то после полного сиквснса нескольких их геномов стало ясно, что у них имеется единственный фактор терминации трансляции класса 1 , родственный I . . i . Более того, было покатано, что из гипертермофильной архебактерий ii в системе i vi с использованием рибосом млекопитающих узнавал все три стопкодона, что дополнительно подтверждает идею структурнофункционального сходства и v . Однако, никакого гомолога 3 или хотя бы 3 у архебактерий не было найдено. Тот факт, что работает в одиночку, косвенно подтверждается отсутствием у него Сдомена, который у I участвует во взаимодействии с 3 Ii i, см. Изучение эукариотических факторов терминации трансляции имеет долгую историю. Мутации в генах, кодирующих чти факторы у дрожжей vii прежнее обозначение 1 кодирует I прежнее обозначение 2 кодирует 3, способны вызывать омнипотентную супрессию супрессию всех трех типов нонсенсмутаций ИнгсВечтомов и Андрианова. Первое непосредственное доказательство того, что I является фактором терминации трансляции, было получено с использованием белков i и X vi, которые гомологичны белку I . v . Оба эти белка были способны стимулировать i vi гидролиз ,I в присутствии рибосом и любого из грех стонкодонов. человека осуществлять терминацию на всех трех стопкодонах и успешно конкурировать с супрессорной тРПК . Участие в терм и наци и трансляции было показано и для дрожжей i . Первичная структура и функции являются консервативными от дрожжей до человека v . i . . Так, экспрессия человека, хомяка или шпорцевой лягушки может комилемеитировать делецию гена у дрожжей . Более того, сверхэкспрессия человека или шпорцевой лягушки в клетках дрожжей при условии одновременной сверхэкспрессии 3 дрожжей существенно снижает i viv нонсенссупрессию, опосредованную тРНК i . и 3. Генетические, биохимические и структурные исследования показали, что имеет доменную организацию . М и Сдомены Рис. Делении Сконцевых аминокислот i или . I . iii . Влияние Скоицевых делений человека и дрожжей на его способность взаимодействовать с 3 как i viv так и i vi изучали в разных лабораториях I . iii . v . i , . Несмотря на различия в использованных методах и видовые отличия ортологичных белков, эти исследования выявили, что удаление последних для . приводят к утрате способности взаимодействовать с 3 как i viv, так и i vi. Такие делении затрагивают консервативный мотив Ixxx, присутствующий в Сдоменс iii . и 3. Поскольку удаление Сконцсвых аминокислот нарушает взаимодействие с 3 и, в то же время, приводит к летальному фенотипу, то можно сделать вывод, что взаимодействие факторов терминании трансляции I и II класса у эукариот, в отличие от эубактерий и архебактсрий, является жизненно важным. Рисунок 1. Доменная организация и пространственная структура 1 человека. А Доменная организация 1. Числами отмечены положения аминокислот, служащих условными границами доменов. В Пространственная структура 1 . мотив последовательность I Iмотив последовательность .