Катионные пептиды как средство переноса ДНК в клетки млекопитающих

• Автор: Игнатович, Ирина Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 120 с. : ил.

Изучение механизмов проникновения комплексов ДНКпептид, а так же влияния свободного пептида на эффективность доставки таких комплексов представляет определенную ценность для понимания механизмов переноса макромолекул через цитоплазматическую мембрану. Выяснение причин, препятствующих эффективной работе векторов экспрессии доставляемых с помощью катионных пептидов в организм животных позволяет вести работ по усовершенствованию средств доставки генетических конструкций. Результаты настоящего исследования могут быть использованы при разработке и реализации проектов, направленных на создание невирусных методов переноса ДНК в организм млекопитающих и человека. IV1 электростатически взаимодействует с плазмидной ДНК с образованием полиэлектролитных комплексов ДНК, которые способны проникать в клетки млекопитающих и обеспечивать эффективную экспрессию перенесенных генов. Комплексы плазмидной ДНК с катионными пептидами и проникают в клетки млекопитающих путем эндоцитоза. Низкая активность комплексов ДНКТАТ при системном введении мышам обусловлена, в частности, взаимодействием комплексов с сывороточным альбумином, что приводит к изменению путей интернализации комплексов. По теме диссертации опубликовано две статьи и 9 тезисов докладов и сообщений на всероссийских и международных конференциях, симпозиумах и съездах. Результаты работы докладывались на международных конференциях СПИД, рак и родственные проблемы СанктПетербург, , гг. Шанхай, , третьем Съезде биохимическою общества России СанктПегсрбург, г. Съезде Федерации европейских биохимических обществ i i i i Брюссель, г. СВР Стокгольм, г. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на . Список литературы содержит . Белок iv ii кодируется вирусом иммунодефицита человека IV1 и играет критическую роль в его репликации. IIIV1 относится к семейству ретровирусов, а, точнее, к группе лентивирусов. Ретровирусы представляют собой РНКсодержащие онкогенные вирусы, чей жизненный цикл включает в себя перевод геномной информации в ДНК в ходе реакции обратной транскрипции образование провируса с последующей интеграцией ировируса в геном инфицированной клетки . Ген присутствует в геномах всех лентивирусов приматов . Геном ретровирусов около т. По этой причине для достижения успешной репликации вируса . IV1 должен кодировать информацию, обеспечивающую тс же функции, что и геномы более крупных вирусов. В связи с этим, каждая открытая рамка считывания вируса должна обеспечивать как можно большую мультифункциональность. Так, белок обеспечивает целый ряд функций почти на всех стадиях жизненного цикла вируса IV1 К. Т. . Полноразмерный белок кодируется двумя экзонами, первым 1 а. Одиночные мутации в районе первых аминокислотных остатков I домен не приводят к критическому изменению свойств белка. В то же время, замены цистеина во II сегменте а. Третий домен содержит высоко консервативный мотив I, общий для вирусов II1V1, IV2 и IV. Участок 1 а. Четвертый домен содержит основной мотив , определяющий РНКсвязывающие свойства i . Рис. Физические домены белка ТЛТ IV1 1 аминокислотных остатков из К. Т. . Над рисунком отмечены некоторые факгоры, способные связываться с различными регионами белка . ТЛТ играет критическую роль в регуляции транскрипции и продукции вируса в клетке, опосредованно взаимодействуя с вирусным промотором I Действуя как транскрипционный активатор, способен связывать короткий, вновь синтезированный лидерный участок РНК элемент ivi iv обеспечивая высокую эффективность транскрипции с В. С. . М. . О. . ТАТассоцнированной киназы ТАК или iiv ii i , представляющим собой гетеродимеры пиклинзависимой протемнкмназы 9 с циклинами Т1, Т2а и 2 i . М. О. Участвуя в активации транскрипции, способен напрямую связываться с такими общими транскрипционными факторами как II i . II V . II . Тем мснсс, для на данный момент не показано прямое взаимодействие с ДНК и не подтвержден механизм активации транскрипции, характерный для других транскрипционных факторов Xi . К.Т.