Сиалидазная активность и морфологические изменения опухолевых клеток нейрального и мышечного происхождения

• Автор: Прошин, Сергей Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 203 с. : 33 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Протеомные и геномные факторы в морфологических изменениях опухолевых клеток

1.1.1. Нарушение эпигенетического контроля

и опухолевый рост

1.1.2. Морфологические изменения нейральных клеток

при воздействии факторов дифференцировки.

1.2. Значение сиалидаз и ганглиозидов в морфологических изменениях опухолевых клеток.

1.2.1. Сиалидазная активность в структурных

изменениях клеточного ядра.

1.2.2. Значение ганглиозидов для морфологических
изменений клеток.
1.2.3. Значение сиалидаз и ганглиозидов в
морфофункционалыюй пластичности нейральных клеток
1.3. Ферменты, участвующие в метаболизме ганглиозидов
1.3.1. Методические особенности исследования
активности ферментов, регулирующих состав ганглиозидов.
1.3.2. Метаболизм ганглиозидов.
1.3.3. Субстратная специфичность разных типов сиалидаз.
1.3.4. Липидные микродомены и сиалидаза ассоциированная
с плазматической мембраной.
1.4. Циклический аденозинмонофосфат как фактор дифференцировки нейральных клеток
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Перевиваемые клеточные линии i viv.
2.2. Поддержание клонов перевиваемой i viv
рабдомиосаркомы РА крыс
2.3. Клеточные культуры и генетическая трансфекция
2.4. Анализ активности сиалидазы
ассоциированной с плазматической мембраной
2.5. Анализ активности лизосомальной
сиалидазы.
2.6. Анализ активности ацетилхолинэстеразы
2.7. Электрофорез белков в полиакриламидном геле ПААГэлектрофорез.
2.8. Количественная полимеразная цепная реакция.
2.9. Иммуноцитохимический анализ
2Импрегнация клеток нитратом серебра
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Морфофункциональные изменения клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА крыс при
воздействии противоопухолевых факторов
3.1.1. Метастатический потенциал клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА крыс при воздействии противоопухолевых факторов
3.1.2. Сиалидазная активность в клетках опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА крыс, контрастных
по метастатическому потенциалу
3.2. Функциональные изменения клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА, связанные с отбором
на повышение и понижение частоты опухолевых
клеток с нарушением структуры ядер
3.2.1. Отбор опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА крыс на повышение и понижение частоты
опухолевых клеток с нарушением структуры ядер
3.2.2. Метастатический потенциал опухолевых клонов, контрастных по частоте клеток с
нарушениями структуры ядер
3.2.3.Активность лизосомальной сиалидазы в клетках опухолевых клонов, различающихся по
нарушениям структуры ядер
3.2.4. Активность сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клетках опухолевых клонов, различающихся по нарушениям
структуры ядер.
3.3. Морфофункциональные изменения нейральных
клеток линии 1 нейробластомы человека.
3.3.1. Морфологические маркеры дифференцировки клеток линии 1. нейробластомы человека
при повышенной экспрессии сиалидазы
ассоциированной с плазматической мембраной.
3.3.2. Анализ активности сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клеточной линии
1 нейробластомы человека
3.3.3. Активность ацетилхолинэстеразы в клеточной линии 1 нейробластомы человека при
воздействии факторов дифференцировки.
3.3.4. Активность лизосомальной сиалидазы в
клеточной линии 1 нейробластомы человека
3.4. Анализ молекулярногенетических маркеров экспрессии сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной
в клеточной линии 1 нейробластомы человека
3.4.1. Верификация продукта транскрипции гена сиалидазы ассоциированной с плазматической
мембраной в клетках 1.
3.4.2. Иммуноцитохимическая верификация клеток 1, положительных по экспрессии сиалидазы ассоциированной
с плазматической мембраной.
3.4.3. Верификация методом протеомного анализа антигена, соответствующего сиалидазе ассоциированной с плазматической мембраной.
ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Данный тип нестабильности может приводить к двум различающимся по своей сути последствиям вопервых, реплицируясь, сестринские хроматиды могут сливаться в точках разрыва поврежднной хромосомы, посредством чего предотвращают нормальное распределение хромосомного материала в анафазе. Следующим этапом, хромосома сформирует мост между полюсами веретена деления, который, наиболее вероятно, разорвтся, что приведт к возникновению v в дочерних клетках хромосом с разорванными концами. В следующем цикле репликации может вновь повториться возникновение хромосом с. Так как точка разрыва может возникнуть где угодно, то есть на всм протяжении анафазного моста, такие хроматидные циклы разрывслияниемост РСМ могут приводить к продолжительно повторяющемуся возникновению v структурных хромосомных аберраций в данной клеточной популяции. Вовторых, дицентрические и кольцевые хромосомы могут также участвовать в подобных циклах перестроек i, . После разрыва моста произойдт слияние разорванных концов, что вновь приведт v к дицентрическим и кольцевым хромосомам и вновь инициирует серию хромосомных РСМ циклов. Так как РСМ циклы вовлекают повторяющиеся перестройки хромосом данный тип нестабильности, наиболее вероятно, будет связан с внутриклеточной гетерогенностью по структурным аберрациям хромосом. Вместе с тем, следует отметить, что при РСМ циклах может также произойти неправильное распределение нормальных хромосом, особенно в тех случаях, когда разрыв, мостов будет происходить в точках прикрепления хромосом к полюсам веретена клеточного деления i, , что, в свою очередь, неизбежно приведт к межклеточной гетерогенности по числу хромосом. Наблюдения и выводы, сделанные МакКлинток привели в дальнейшем к пониманию причинноследственных механизмов обусловливающих возникновение аномалий ядер в клеточных популяциях. Хорошо известно, что в опухолях часто наблюдается изменение морфологии ядер i, . Считается, что обнаружение повышенного содержания морфологически изменнных клеток в крови крупного рогатого скота является признаком поражения коров лейкозом Бурба и др. Изменения аномалий ядер часто варьируют по форме, размеру, а также, структуре хроматина хроматин гиперхромен или представлен неоднородным окрашиванием. Контуры ядерной мембраны богаты выпячиваниями протрузиями и инвагинациями. Например, Ридеровские формы лимфоцитов, часто наблюдающиеся при лейкозе крупного рогатого скота, имеют ядра неправильной формы с бухтообразным вдавлением с одной стороны. К настоящему времени, подавляющее большинство исследователей также относят к аномалиям клеточного ядра микроядра, хромосомные хроматидные мосты и ядерные аномалии, образовавшиеся в результате разрыва мостов ядра с протрузиями, хвостатые. Мосолов, . Монахова, . Большинство исследований процессов амплификации генетического материала проводилось на клеточных линиях, при экспозиции последних к определнным цитотоксическим лекарствам в варьирующих дозах с тем, чтобы индуцировать повышенную экспрессию генов, вовлеченных в метаболизм клетки иили мембранный транспорт. На основе полученных результатов было сделано предположение, что повторяющиеся акты репликации некоторых участков генома в отсутствие митотической сегрегации хромосом могут приводить к образованию избыточных фрагментов, ДНК циркулярных ацентрических структур, достигающих по размеру нескольких тысяч пар оснований . Субмикроскопические эписомы размером т. Предполагается, что геномная амплификация может начинаться с образования линейных последовательностей ДНК таких как гомогенно окрашивающиеся регионы ГОР и регионы с повторяющейся исчерченностью РПИ, которые могут, в свою очередь, последовательно трансформироваться в ацентрические последовательности циркулярной ДНК i i, , , . Ьаспартата, возникающие хромосомные разрывы с
последующим слиянием сестринских хроматид инициируют длительные циклы разрывслияниемост, что приводит к возникновению резизтентных клонов. Генетический анализ клеток таких резистентных клонов показывает, что клеточный геном нест амплифицированную инвертированную последовательность гена дегидрофолатредуктазы .