Исследование экзоцитоза в нейтрофилах человека при миелопролиферативных заболеваниях

• Автор: Нуянзина, Валентина Александровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саранск
• Количество страниц: 110 с. : ил.

1.1 .Миелопролиферативные заболевания

1.1.1. Хронический миелолейкоз

1.1.2. Эритремия

1.1.3.Сублейкемический миелоз миелофиброз

1.2. Гранулы нейтрофилов человека

1.2.1. Характеристика и классификация гранул нейтрофилов

1.2.1.1. Азурофильные первичные гранулы

1.2.1.2. Специфические вторичные гранулы

1.2.1.3. Желатиназные гранулы

1.2.1.4. Секреторные везикулы

1.2.2. Экзоцитоз гранул нейтрофилов

1.3. Гипотеза слипания и слияния мембран гипотеза
1.3.1. Характеристика основных белковых компонентов модели
1.3.1.1 .Белки семейства Vсинаптобрсвинов
1.3.1.2. Синтаксины
1.3.1.3.
1.3.1.4.
1.3.1.5.
1.3.2. Механизм слипанияслияния мембран гипотеза Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1. Объекты исследования
2.2. Материалы
2.3. Методы
2.3.1 Выделение нейтрофилов человека
. 2.3.2. Активация нейтрофилов
2.3.3. Определение активности миелопероксидазы
2.3.4. Определение активности лизоцима
2.3.5. Определение активности щелочной фосфатазы
2.3.6. Иммунофлуоресцентная микроскопия
2.3.7. Электронная микроскопия
2.3.8. Электрофорез белков
2.3.9. Иммуноблотгинг Вестернблот анализ
2. 3.9.1. Перенос фракций из геля на фильтр
2.3.9.2. Иммунное выявление антигенов на фильтре
2.3 Иммунопреципитация
Глава 3. Результаты и их обсуждения 3.1. Оценка экзоцитоза внутриклеточных гранул нейтрофилов
больных миелопролиферативными заболеваниями 3.2. Идентификация белковмедиаторов экзоцитоза в лейкоцитах
пациентов с миелопролиферативными заболеваниями 3.3. Взаимодействие белков группы в нейтрофилах больных
л миелопролиферативными заболеваниями
Выводы
Список литературы
ВВЕДЕНИЕ


Вполне вероятно, что отмеченные выше морфологические и функциональные изменения циркулирующих нейтрофилов появляются вследствие нарушений механизмов, управляющих экзоцитозом лейкемических нейтрофилов. Таким образом, исследования, нацеленные на изучение механизмов экзоцитоза, в том числе белкового аппарата, вовлеченного в экзоцитоз нейтрофилов больных миелопролиферативными заболеваниями, представляются весьма важными для понимания морфофункционального состояния и патофизиологии лейкемических нейтрофилов. Цель и задачи исследовании. Основной целью данной работы явилось исследование молекулярных механизмов экзоцитоза внутриклеточных гранул нейтрофилов периферической крови человека при различных миелопролиферативных заболеваниях. Основные положения диссертации, выносимые на защиту. Нейтрофилы периферической крови больных миелопролиферативными заболеваниями являются дефектными по системе регулируемого экзоцитоза внутриклеточных гранул. Нейтрофилы пациентов с миелопролиферативными заболеваниями экспрессируют множественные изоформы белков группы . Белок V1, играющий ключевую роль в экзоцитозе азурофильных гранул, отсутствует в нейтрофилах больных хроническим миелолейкозом. Способность к образованию V2 содержащих комплексов, определяющих состыковку и слипаниеслияние мембран в нейтрофилах пациентов с хроническим миелолейкозом и миелофиброзом, снижена. Научная новизна работы. В настоящей работе впервые проведено систематическое исследование экзоцитоза нейтрофилов больных миелопролиферативными заболеваниями. Впервые изучена экспрессия белков медиаторов экзоцитоза в нейтрофилах при мислопролиферативных заболеваниях, в частности нами было показано, что в нейтрофилах пациентов с хроническим миелолейкозом отсутствует белок V1, играющий ключевую роль в процессе экзоцитоза внутриклеточных гранул нейтрофилов в норме. Также впервые установлена внутриклеточная локализация синтаксина 4 и V2 в покое и в клетках, подвергнутых стимуляции. Причем впервые продемонстрировано, что способность VАМР2 к белокбелковым взаимодействиям с указанными выше белками в нейтрофилах пациентов с миелофиброзом и хроническим миелолейкозом значительно снижена, по сравнению с нормой. Научнопрактическая ценность работы. Результаты могут быть использованы в фундаментальных исследованиях при изучении механизмов слипанияслияния мембран в норме и при патологии. Результаты могут быть использованы в прикладных исследованиях, посвященных установлению роли в индукции и развитии защитных и воспалительных функций нейтрофилов пациентов с хроническим миелолейкозом и миелофиброзом. Апробация работы. Результаты работы были представлены на конференциях молодых ученых Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева Саранск, гг. Огаревские чтения Саранск, , на всероссийской конференции Фундаментальные и прикладные исследования в медицине Кипр, . Работа прошла апробацию на объединенном заседании кафедр генетики биологического факультета и цитологии, гистологии и эмбриологии медицинского факультета Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Миелопролиферативные заболевания МПЗ представляют собой группу опухолей кроветворной ткани, возникающих вследствие опухолевой трансформации стволовых полипотентных клеток i . Постепенное увеличение количества опухолевых элементов костного мозга приводит к замещению клеток нормального кроветворения патологическим клоном, в клетках которого, сохраняющих способность к созреванию, нарушается функциональная активность Морозова В. Т. и др. По ФранкоАмериканоБританской ФАБ классификации выделяют четыре основные формы МПЗ хронический мнелоидный лейкоз, сублейкемический миелоз миелофиброз, эритремия истинная полицитемия и идиопатичсская тромбоцитсмия хронический мегакариоцитарный лейкоз i . И., Овчаров С. И., . Для терминальной стадии характерно развитие бластных кризов появление в периферической крови бластных клеток более , в связи с чем, заболевание приобретает черты острого лейкоза.