Структурная организация, экспрессия и эволюция гена, кодирующего секреторный белок ssp160 у видов рода Chironomus

• Автор: Березиков, Евгений Викторович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 112 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Секреторные белки слюшьх желез хирономид

1.1.1. Исторический экскурс

1.1.2. Структура и функция слюнной железы личинок хирономид

1.1.3. Классификация iбелков хирономид.

1.1.4. Белок 0

1.1.5. Регуляция iгенов i

. БЕЛКИ .X И ИХ ГЕНЫ.

1.2.1. 1иброин

1.2.2. Белок Р и iфиброин
1.2.3. Серицин
1.2.4. Регуляция экспрессии iбелков x i.
1.3. iбелки i .
1.3.1. iфиброин.1
1.3.2. Белок Р
1.3.3. Сероин.
1.4. РОЛЫ ОРМОНОВ В РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ IБЕЛКОВ
1.5. влияние внешних факторов на рлюту iжелезы.
1.6. Секреторные белки слюнной железы
1.6.1. Структура генов
1.6.2. Регуляция генов i
. Консервативность механизмов регуляции iгенов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Сбор и определение личинок хирономид.
2.2. Скриншггаюмной библиотеки
2.3 Выделение ДНК.
2.3.1. Выделение фаговой ДНК
2.3.2. Выделение геномной ДНК.
2.3.3. Выделение ппазмидной ДНК.
2.3.4. Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей
2.4. КЛОНИРОВАНИЕ ДНК.
2.4.1. Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции
2.4.2. Лигирование
2.4.3. Приготовление компетентных клеток К i
2.4.4. Трансформация клеток .i методом тетового шока
2.5. Определение нуклеотид юй последовательности фрагментов ДНК
2.6. ПЦРамплификация
2.7. Электрофорез ДНК в агарозных гелях.
2.8. Картирование сайта инициации транскрипции
2.9. ГИБРИДИЗАЦИЯ I I
2.9.1. Приготовление ДНКзондов.
2.9.2. Гибридизации i i на РНК слюнных желез хирономид
2.9.3. Гибридизация i i на политенные хромосомы хирономид.
2.9.4. Иммунологическая детекция.
2. Компьютерный АНАЛИЗ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ДНК
2Л0.1. Построение филогенетических деревьев
22. Распознавание сигнальной последовательности.
23. Распознавание потенциальных регуляторных сайтов.
24. Распознавание потенциальных сайтов связывание нуклеосом.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. СТРУКТУР 1АЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ГЕНА 0.
3.1.1. Скрининг геномной библиотеки . i. Клон рС2А
3.1.2. Определение структуры кодирующей части гена .
3.1.3. Картирование сайта инициации транскрипции в гене .
3.1.4. Определение сигнального пептида
3.1.5. Анализ промоторной области гена .
3 .2. ГЮЛИМОРФИЗМ ГЕ I 0
3.2.1. Популяционный полиморфизм гена у i i
3.2.2. Межвидовая вариабельность гена
3.3. Экспрессия гена
3.4 ЭВОЛЮ1ЩЯ ГЕНА 0.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


А именно, было показано, что гранулярный секрет в так называемых специальных клетках у гибридов . iivi х . . iivi, содержащего 4, который отсутствует у . , . Также был идентифицирован белковый компонент секрета, присутствие которого коррелировало с развитием кольца 4 , , , . Кроме этого, в секрете был обнаружен высокомолекулярный белок, позднее названный I, который, скорее всего, являлся продуктом РНК, имеющей отношение к кольцам I и 2 , i, , . При дальнейшем изучении секреторных белков и колец Бальбиани, и с развитием методов клонирования и сиквенирования ДНК было подтверждено, что в кольцах Бальбиани действительно содержатся гены, кодирующие белки секрета. Структура и функция слюнной железы личинок хирономид. Слюнная железа функционирует на протяжении всей личиночной жизни и разрушается путем гистолиза лишь во время метаморфоза , , Кикнадзе и др. Агапова и Кикнадзе, . Слюнная железа личинок хирономид парный секреторный орган, морфологически представляющий собой уплощенный мешочек, каждая из поверхностей которого образована одной крупной тонкой эпителиальной клеткой, а боковые стенки слоем крупных железистых клеток, содержащих политенные хромосомы. В этих клетках происходит интенсивный синтез iбелков, которые секретируются в просвет железы, где формируется и хранится секрет, который, в свою очередь, выводится через секреторный проток, расположенный ближе к передней части железы. Секреторный проток имеет почти такую же длину, как и сама железа. Протоки от двух желез соединяются в общий короткий секреторный канал, который открывается в ротовую полость личинки у основания гипофаринкса , i, . Количество секреторных клеток в слюнной железе варьирует у разных видов хирономид от у . Гундерина и др. . и . , Распределены эти клетки несимметрично и образуют несколько долей в слюнной железе заднюю, основную, боковую, и переднюю. У некоторых видов в дополнение к передней доле выделяют специальную долю , i, . Специальной доле слюнной железы посвящена отдельная глава в настоящей диссертации. Классификация iбелков хирономид. В основе классификации белков секрета слюнных желез лежит их разделение по молекулярным весам, определяемым по подвижности этих белков в гелях. Одной из трудностей при биохимическом исследовании iбелков является их слабая растворимость. Секрет из слюнных желез собирают, выпуская его из железы либо в физиологическом растворе, где он поддерживается в растворенном состоянии, либо осаждая его этанолом непосредственно в полости железы и извлекая секреторные тяжи с помощью микроиголок Далее секрет анализируют с помощью градиентного гельэлектрофореза в присутствии денатурирующих агентов Копанцев и др. Две важные особенности секреторных белков, впервые описанные Гроссбахом, заключаются в том, что аминокислотный состав этих белков достаточно однороден, и некоторые их них имеют очень большие молекулярные веса , . На самом деле, iбелки очень вариабельны, и их молекулярные веса могут различаться на два порядка. С. , i, . Для других видов показано наличие сходных фракций белков Гундерина и др. По молекулярному весу секреторные белки условно делят на 3 класса высокомолекулярные белки 0 , белки среднего молекулярного веса 00 и низкомолекулярные белки до 0 . Информация о структуре и хромосомной локализации генов, кодирующих секреторные белки слюнной железы С. Таблица 1. Секреторные белки слюнной железы личинок С. Семейство высокомолекулярных белков. Впервые i I белки были описаны У. Гроссбахом , как фракция I секрета слюнных желез, состоящая из белков с очень большим молекулярным весом. Фракция Г представляет собой семейство белков с молекулярными весами от 0 до . Белки являются основным компонентом слюнных желез, их содержание может достигать общего содержания белков в слюнных железах , , а