Оценка жизнеспособности миокарда изолированного сердца методом лазерно-индуцированной флюоресценции в сопоставлении с комплексным морфологическим анализом (экспериментальная работа)

• Автор: Потапенко, Мария Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 115 с. : 30 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Проблема морфологической оценки при диагностике сердечного трансплантата.

1.2 Микроскопическое строение сердечной мышцы.

1.3 Энергетический метаболизм миокарда

1.4 Ишемическое повреждение миокарда

1.4.1 Модели ишемии миокарда i viv

1.4.2 Механизмы ишемического повреждения кардиомиоцитов донорского сердца.

1.4.3 Патологическая анатомия инфаркта миокарда.

1.4.4 Метаболические нарушения при ишемии миокарда

1.5 Применение лазерного излучения в медицине.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Объекты исследования
2.2 Моделирование состояния донорского сердца перед
трансплантацией.
2.3 Гистоморфометрическое исследование
2.3.1 Исследование жизнеспособности миокарда свиньи.
2.3.2 Исследование жизнеспособности миокарда крыс.
2.4 Исследование интенсивности лазерноиндуцированной флюоресценции миокарда изолированного сердца
2.4.1 Регистрация спектров методом сканирования
2.4.2 Многоканальная система регистрации спектров.
2.4.3 Измерение глубины проникновения лазерного излучения в миокард.
2.5 Статистические методы исследования
ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
МИОКАРДА СВИНЬИ В ПРОЦЕССЕ СОХРАНЕНИЯ
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ МИОКАРДА КРЫСЫ В ПРОЦЕССЕ СОХРАНЕНИЯ.
4.1 Исследование динамики структурных изменений миокарда изолированного сердца в процессе сохранения.
4.2 Оценка деградации ядерного материала в процессе сохранения миокарда изолированного сердца
4.3 Динамика содержания ионов кальция в миокарде изолированного сердца в процессе сохранения
4.4 Динамика перекисного окисления липидов в миокарде изолированного сердца в ходе сохранения.
4.5 Динамика содержания функционально активных митохондрий ткани в процессе сохранения миокарда изолированного сердца
4.6 Исследование состояния энергетического метаболизма миокарда изолированного сердца в процессе сохранения.
4.7 Влияние острой ишемии на реакции специализированного и рабочего миокарда изолированного сердца.
ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ИНТЕНСИВНОСТИ ЛАЗЕРНОИНДУЦИРОВАННОЙ ФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ МИОКАРДА ИЗОЛИРОВАННОГО СЕРДЦА
5.1 Влияние лазерного излучения на миокард
5.2 Исследование глубины проникновения лазерного излучения в ткань миокарда
5.3 Исследование динамики жизнеспособности миокарда изолированного сердца свиньи с помощью лазерного излучения
5.4 Исследование жизнеспособности миокарда крысы в процессе сохранения с помощью лазерного излучения
ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
выводы.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Показано, что на ранних этапах целесообразно и информативно использование морфологических методов, основанных на оценке функциональной активности митохондрий. В течение первого часа сохранения миокарда изолированного сердца, из данных методов, максимально информативно определение суммарного и внутриклеточного кальция, определение активности ферментов окислительновосстановительного ряда и уровня свободных радикалов кислорода. На поздних этапах сохранения методом, свидетельствующим о необратимых изменениях в кардиомиоцитах, является определение фрагментации и дезорганизации компанентов ядра хроматина и разрушение ядра как клеточного компартмента. Для оценки жизнеспособности миокарда изолированного сердца для целей трансплантации на всех этапах целесообразно использование метода определения интенсивности лазерноиндуцированной флюоресценции, поскольку метод по временным характеристикам сопоставим с комплексом морфологических методов, малоинвазивен, прост в использовании и не требует много времени. При комплексном морфологическом исследовании показаны межвидовые различия периода жизнеспособности миокарда изолированного сердца у экспериментальных животных крыс и свиней, что вносит вклад в организацию экспериментальных исследований. Предложенные нами практические рекомендации могут быть полезны для врачей морфологов, патологических анатомов, гистологов, кардиоморфологов, работающих в крупных кардиологических центрах и участвующих в работе бригад при пересадке сердца трансплантологов, реаниматологов, сердечнососудистых хирургов. Комплексный анализ морфологических изменений мышечной ткани изолированного сердца на этапах его сохранения для целей трансплантации в эксперименте показал снижение его жизнеспособности. Анализ морфофункциональных изменений показал, что устойчивость проводящих структур отделов сердца к ишемии снижалась в направлении атриовентрикулярный узел миокард желудочков миокард предсердий, устойчивость к ишемии в процессе сохранения проводящих структур изолированного сердца ниже, чем устойчивость рабочих кардиомиоцитов. НАДНдиафоразы. Снижение жизнеспособности миокарда изолированного сердца процессе его сохранения, сопровождалось снижением интенсивности лазерноиндуцированной флюоресценции миокарда, в процессе его сохранения. Комплексный морфологический анализ позволил выявить межвидовые различия жизнеспособности изолированного сердца на этапах его сохранения у экспериментальных животных крыс и свиней, этот период был более коротким у крыс и составлял до 2 часов, у свиньи же он достигал 4 часов. ГЛАВА 1. Сегодня трансплантация сердца приняла позицию реальной терапевтической альтернативы для пациентов страдающих терминальной стадией сердечной недостаточности. В мире ежегодно проводится 2,7 4,5 тысяч трансплантаций сердца или комплекса сердцелегкие 1. Развитие этого метода лечения повышает необходимость в методах сохранения и диагностики донорских сердец , 6, 2, 2, 3. Увеличение времени сохранения предпочтительнее для более дистантной доставки органов, создания более эффективного пула доноров, лучшей подготовки реципиентов, хирургической бригады и безопасности для процедуры трансплантации 6, 2. В настоящее время общепринят так называемый дистанционный забор, когда изъятие и подготовку будущих трансплантатов выполняют в той же клинике, где была констатирована смерть мозга у донора, а затем перевозят органы в трансплантационные центры, иногда весьма удаленные 1. Хотя оптимальным считают срок сохранения сердца до 3 часов 2, удлинение аноксии органа до часов не исключает возможности трансплантации сердца, но существенно повышает ее риск . Тем не менее, отдельные зарубежные клиники используют сердца со сроком сохранения более 6 часов 9. Реалии отечественной трансплантологии также диктуют необходимость пересаживать сердца после длительной консервации, обусловленной транспортировкой из отдаленных медицинских центров 1. В настоящее время в мире существую несколько протоколов оценки жизнеспособности и функциональной способности консервированного сердца , однако универсальной системы не существует.