Иммуногистохимическое исследование фенотипа и инвазивного потенциала опухолей поджелудочной железы

• Автор: Гуревич, Лариса Евсеевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 218 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эмбриогенез и гистогенез эпителиальных тканей поджелудочной железы.

1.2 Клетки предшественницы экзокринной ткани поджелудочной железы.

1.3 Клетки предшественницы эндокринной ткани поджелудочной железы.

1.4 Фенотип экзокринпых клеток поджелудочной железы.

1.4.1 Фенотип клеток протокового эпителия.

1.4.2 Фенотип эндокринных клеток поджелудочной железы.

1.4.3 Роль полипотентных клеток в неопластической трансформации эпителиальных

тканей ПЖ.
1.5 Адгезивные свойства клеток и роль адгезивных молекул в нормальном функционировании и неопластической трансформации ткани
1.5.1 Свойства и функции адгезивных молекул.
1.5.2 Молекулы нейроадгезии.
1.5.2.1 Молекулы , или ПСАМ
1.5.2.2 Молекулы
1.5.2.3 Роль молекул нейроадгезии в канцерогенезе ПЖ.
1.5.3 Кадхерины.
1.5.3.1 Екадхерин.
1.5.3.2 кадхерин.
1.5.3.3 Роль молекул кадхеринов в неопластической трансформации
1.5.3.4 Роль кадхеринов в неопластической трансформации клеток ПЖ
1.5.4 Адгезивные молекулы ЕрСАМ
1.5.5 Адгезивные молекулы семейства
1.5.5.1 .Физиологическаяроль
1.5.5.2 Роль молекул во взаимодействиях клеток с ЕСМ
1.5.5.3 Экспрессия в нормальных тканях ПЖ.
1.5.5.4 Роль в канцерогензе.
1.5.5.5 Роль в опухолях ПЖ
1.6 Межклеточные взаимодействия и роль экстрацеллюлярного матрикса в норме и при патологии.
1.6.1 Роль металлопротеиназ в регуляции тканевого гомеостаза
1.6.2 Роль металлопротсиназ в ангиогенезе5
1.6.3 Роль мсталлопротеиназ в новообразованиях различного генеза
1.6.4 Роль металлопротеиназ 2 и 9 в гомеостазе тканей и неопластической
трансформации.
1.6.5 Роль мсталлопротеиназ в обеспечении инвазивного потенциала новообразований
1.7 Факторы, участвующие в регуляции клеточного цикла
1.7. 1 Семейство протеинов Ьс.
1.7.2 Роль протеинов семейства Ьс в канцерогенезе
1.7.3 Роль регуляторных протеинов в канцерогенезе ПЖ
1.7.4 Экспрессия протеинов р и Кгая в новообразованиях ПЖ
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материал исследования
2.2 Методы исследования
2.2.1 Морфологические методы исследования.
2.2.1.1 Гистологический метод.
2.2.1.2 Иммуногистохтический метод.
2.2.2 Системы оценки экспрессии различных ИГХ маркеров
2.2.3 Статистический метод
3. ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОТИПА КЛЕТОК ОПУХОЛЕЙ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
3.1 Изучение фенотипа экзокриниых опухолей ПЖ.
3.1.1 Исследование фенотипа муцинознокистозных опухолей
3.1.2 Исследование фенотипа внутрипротоковых опухолей.
3.1.3 Исследование фенотипа аденокарцином.
3.1.4 Изучение фенотипа анапластичсских опухолей ПЖ.
3.1.5 Исследование фенотипа клеток солиднопссвдопапнллярных опухолей.
0 3.2 Исследование фенотипа нейроэндокринных новообразований
3.2.1 Исследование фенотипа клеток инсулином, глюкагном, смешанно клеточных и
нефункционирующих опухолей.
3.2.2 Исследование фенотипа нефункционирующих НЭОПЖ
3.3 Исследование фенотипа клеток гастрином
4. ИЗУЧЕНИЕ ФАКТОРОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНОГО ЦИКЛА
4.1 Определение пролиферативной активности опухолей поджелудочной железы
4.2 Изучение экспрессии протеинов, регулирующих клеточный цикл
4.2.1 Изучение экспрессии протеинов, регулирующих апоптоз ВАХ и Вс1Х.
4.2.2 Определение коэффициента апоптоза.
4.2.3 Изучение экспрессии протеина р
4.3 Изучение особенностей экспрессии трансформирующего фактора роста
5. АДГЕЗИВНЫЕ СВОЙСТВА КЛЕТОК ОПУХОЛЕЙ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
5.1 Экспрессия молекул нейроадгезии в опухолях поджелудочной железы
5.2 Экспрессия молекул кадхеринов.
5.2.1 Экспрессия кадхерина.
5.2.2 Экспрессия Екадхерина.
5.2.3 Экспрессия молекул
6. Взаимодействие и соотношение компонентов экстрацеллюлярного матрикса и паренхимы опухолей поджелудочной железы различного генеза.
6.1 Экспрессия компонентов ЕСМ
6.1.1 Экспрессия коллагена IV типа.
6.1.2 Экспрессия ламинина
6.2 Экспрессия матриксных металлопротеиназ ММР2 и ММР
6.2.1 Экспрессия ММР2.
6.2.2 Экспрессия ММР9.
7. ПРЕДОПУХОЛЕВЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭНДОКРИННОЙ И ЭКЗОКРИННОЙ ТКАНИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
7.1 Опухолеподобные изменения в ткани поджелудочной железы при экзокринных опухолях
7.2 Опухолеподобные изменения в ткани поджелудочной железы при эндокринных опухолях
7.3 Опухолеподобные изменения во внсопухолсвой ткани поджелудочной железы при гастриномах.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Различные линии Вклеток, как и клетки нервной ткани нейроны, экспрессируют рецепторы к нейротрофину. В экспериментальных моделях клетки ПЖ линии АК1 проявляли свойства экзокринных и эндокринных клеток и могли соответственно трансформироваться и в ацинарные и в инсулинпродуцируюшие клетки 6,8. В протоках и вновь сформированных островках у ти дневных эмбрионов человека в ПЖ выявляется высокая активность энзима кислой ргапактозидазы, тогда как в ПЖ взрослых она очень слабая или вообще отсутствует. Клетки, экспрессирующие этот энзим, экспрессируют также тирозин гидроксилазу ТН, что было описано раньше для предшественников островковых клеток у мышей 3. После обработки энзимами и культивирования клеток эмбриональной ПЖ можно наблюдать клеточные колонии, напоминающие островки, но с более высоким содержанием недифференцированных клеток. Более чем в клеток таких скоплений, наблюдается повышенная активность кислой бетагалоктозидазы 7. После трансплантации таких островковоподобных скоплений бсстимусным мышам у них формируется ткань, в которой число дифференцированных эндокринных клеток увеличено. Другими потенциальными маркерами эндокринных предшественников являются нейропептид У 3, пептид УУ 5, БТЕ1, а возможно и РР 2,3,3. Установлено, что Вклетки, которые дифференцируются из предшественников, экспрессируют ген РПХ1 и при дефиците островковой ткани в ПЖ взрослого организма эти клетки сохраняют способность к эндокринноклеточной дифференцировке 1,3. Эмбриональный антиген человека 1 к 7 неделе гестации экспрессируют до клеток протокового эпителия, в ПЖ взрослых только субпопуляция островковых Вклсток. Инсулинпродуцирующие клетки уже к 7 неделе гестации, то есть задолго до формирования зрелых островков, выявляются в эпителии примитивных протоков ПЖ, то есть эмбриональный антиген 1 непосредственно связан с днффсренцировкой Вклсток. В Аклетках эмбриональных островков ПЖ был выявлен пептид . Этот пептид ИГХ раньше всего выявлялся именно в Аклетках, где он в ранний период эмбрионального о развития ПЖ коэкспрессирован с инсулином и глюкагоном, но в дифференцированных Вклстках не выявляется. При появлении соматостатин и РРпродуцирующнх клеток в них также наблюдается коэкспрессия соответствующих гормонов с пептидом , но, в отличие от А и Вклеток, она сохраняется в них и в более поздние сроки гестации. Следовательно, экспрессия пептида является характерным свойством ранних эндокринных предшественников 5. В 2х недельных культурах эндокринных клеток, выделенных из островков ПЖ взрослых мышей, в инсулинпродуцирующих клетках появлялись нейрофилламенты промежуточные филламенты, свойственные клеткам нервной ткани. ПЖ виментина и цитокератина , что позволило им сделать вывод о том, что виментин также является маркером одной из ранних стадий дифференцировки полипотентных эндокринных предшественниц. При использовании маркера протоковых клеток ЦК и нейроэндокринного маркера синаптофизина удалось показать наличие коэкспрессии этих маркеров в эндокринных предшественниках, которые еще не синтезировали ни одного из островковых гормонов. Это было первым прямым доказательством существования промежуточного этапа дифференцировки полипотентных клеток ПЖ человека . Популяция синаптофизинпозитивных и гормоннегативных клеток отличается более высокой, чем более дифференцированные гормонпозитнвные клетки, пролиферативной активностью. Недавно были получены новые доказательства существования таких промежуточных клеток. Так, промежуточный филламент нестин, хорошо известный как маркер стволовых клеток центральной нервной системы, экспрессировали небольшие группы ЦКпозитивных и гормоннегативных клеток, не формировавших никаких протокоподобных структур, расположенных на периферии зрелых островков 2. Наличие на периферии эндокринных островков, на границе эндо и экзокрин ной тканей специальной популяции промежуточных клеток еще в г. Ю.К. Елецкий и В. В.Яглов ,,. В этих клетках на электронномикроскопическом уровне выявлялись одновременно гранулы двух типов эндокринные и экзокринные зимогенные.