Ультраструктурная и цитохимическая характеристика макрофагов, инфицированных РНК-содержащими вирусами

• Автор: Плехова, Наталья Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 330 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Краткая характеристика вирусов

семейств Рсогпаугсае, Пауугсае и Випуаугсае

1.2. Некоторые теоретические аспекты процесса взаимодействия эукариотических клеток с вирусами

1.2.1. Современные представления о механизмах входа

вирусов в клетку

1.2.2. Стадии взаимодействия вирусов и клеток

1.3. Патология клетки при вирусном инфицировании

1.3.1. Классификация типов и форм вирусной инфекции
клеток
1.3.2. Ультраструктурная патология клеток, инфицированных вирусом
1.4. Клетки моноцитарномакрофагальной системы в патогенезе вирусных инфекций
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. МАТЕРИАЛ
2.1.1. Инфекционные агенты
2.1.2. Экспериментальные животные
2.2. МЕТОДЫ
2.2.1. Метод получения первичной культуры резидентных макрофагов
2.2.2. Методы оценки динамики накопления вирусного анти гена в клетках
2.2.3. Методы оценки морфофункциональноп активности макрофагов
2.2.4. Методы электронной микроскопии
2.2.5. Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. МОРФОФУ НКЦИОАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ МАКРОФАГОВ, ЗАРАЖЕННЫХ ХАНТАВИРУСОМ
3.1. Функциональная активность макрофагов, инфицированных хантавирусом
3.2. Ультраструктурная характеристика процесса взаимодействия макрофагов с хантавирусом
ГЛАВА 4. МОРФОФУИКЦИО1АЛЫ1АЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
МАКРОФАГОВ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИРУСОМ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
4.1. Морфологическая и функнкцпопальпая характеристика макрофагов, зараженых вирусом клещевого энцефалита
4.2. Ультраструктура макрофагов, инфицированных вирусом
клещевого энцефалита и его морфогенез ГЛАВА 5. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАКРОФАГОВ ПРИ ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ЗЛ. Морфофуикциональное изменение макрофагов, инфицированных энтеровирусами
3.2. Ультраструктурная характеристика процесса взаимодействия макрофагов с энтеровирусами
3.2.1. Способы проникновения вирусов семейства Рсогпаугсае в резидентные макрофаги
3.2.2. Сравнительная характеристика ультраструктурних изменений макрофагов, зараженных вышеуказанными видами энтеровирусов
ГЛАВА 6. НИТРОКСИДОБРАЗУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ МАКРОФАГОВ, ИНФИЦИРОВАННЫХ РНКСОДЕРЖАЩИМИ ВИРУСАМИ
ГЛАВА 7. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МОРФОФУИКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ РЕЗИДЕНТНЫХ МАКРОФАГОВ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИРУСАМИ СЕМЕЙСТВ Рсогпаугсае, Науугсае и Випуаугсае ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
Рекомендации для внедрения результатов исследования СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ЛТФаза
ГТФазы
КФ
Мф
НАД ЫАО НАДН ЫАОН
аденозин фифосфатаза
вирус клещевого энцефалита
гуанинтрифосфатазы
иммуноферментный анализ
кислая фосфатаза
лактатдегидрогеназа
макрофаг
никотинамидадениндинуклеотид
никотинамидадениндинуклеотид восстановленный НАДФ ИАГР никотинамидадениндинуклеотидфосфат НАДФНКАОРР1никотинамидаденимдинуклеотидфосфат восстановленный
нМФА непрямой метод флуоресцирующих антител
нет нитросиний тетразолий
сдг сукцинатдегидрогеназа
сод супероксиддиемутаза
спэв культура клеток ночек эмбриона свиньи
ецк средний цитохимический коэффициент
хв хантавирус
НО гидроксильный радикал
НО, пероксидный радикал
Н пероксидный ион
н2о2 перекись водорода
Ч индуцибельная нитроксидсинтаза
0 оксид азота
ПО нитроксильный анион
МО нитросониевый катион
нитрит
ЫОз нитрат
о2 молекулярный кислород
от супероксидный анионрадикал
о2 синглетный кислород
ожю пероксинитрит
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


После первоначального связывания с гепарансульфагным протеогликаном, эти вирусы присоединяются к аффинным ему рецепторам, которые индуцируют эндоцитоз и последующее слияние вирусного суперкапсида с плазмалеммой клетки , 8. Кроме того, выявлена способность одного и того же вируса связываться с различными рецепторами. Аденовирусы присоединяются к рецепторам иммуноглобулинового семейства и интегринам xv3 и v5 4, вирус кори с рецептором и еще с одним пока неизвестным рецептором 5, вирус Коксаки с микроглобулином и v 3 интегрином 6. В процессе проникновения в клетку последнего вируса, относящегося к неодетым, его нуклеокапсид икосаэдрального типа претерпевает конформационные изменения 0, которые выражаются в формировании каньонов на ого поверхности. С помощью этих каньонов происходит связывание с трансмембранным протеином иммуноглобулинового семейства с двумя внеклеточными доменами молекулярной массой кДа, общим для аденовирусов и вируса Коксаки xi vivi 7. Причем, некоторые энгеровирусы Коксаки В для успешного входа в клетки могут связываться с корецептором семейства интегрииов рецептор фактора, вызывающего разрушение, i , 6, 9. Полповирус, семейства пикорпавирусов, связывается со специфическим для него рецептором полиовирусным V, 5, содержащим иммуноглобулиновые внеклеточные домены экспрессированные в 4х объединенных вариантах а, , у и а названным 8. Также пикорнавирусы могут присоединяться к различным клеточным интегринам а2 , ач , v и т. Места, где связывается полиовпрус с клеточными рецепторами, солокализованы с аминокислотами в каньонах нуклеокапсида 0, ИЗ, и топография подобных мест его нуклеокапсида определяет тропизм к различным тканям организма. У человека белки полиовирусного рецептора экспрессированы на многих клетках и тканях, включая тонкий кишечник, легкие, печень, сердце, нейроны вегетативной нервной системы, мышцы 8. Указывается, что чувствительность к поливирусной инфекции положительных по наличию рецептора мононуклеарных клеток крови может играть важную роль в инвазии этого вируса в центральную нервную систему 9. Полиовирусный рецептор также может использоваться для присоединения и других вирусов, таких как, например, вируса а герпеса 7. После адгезии вируса на поверхности наминается процесс перемещения его генома и сопутствующих белков через клеточную мембрану в цитоплазму. Этот процесс получил название проникновение или пенетрация. Ранее относительно механизмов входа вируса в клетку было принято, что отдельный или несколько гетерогенных вирионов могут проникать в клетку путем своеобразного микрофагоцитоза виропексиса 7, 2, или локально нарушая целостность клеточной плазмалеммы, а также при прямом слиянии с нею оболочки вируса 4. Термин виропексис был предложен с целью его отличия от фагоцитоза и обозначает слияние вирусного суперкапсида с мембранами клетки или ядра с помощью специальных белков слияния, при этом капсид оказывается в клетке хозяина, а суперкапсид вместе с белком встраивается в плазмалемму. В последние годы, в связи с возможностью использования новых методов исследования, позволяющих изучать молекулярную основу различных процессов в живых клетках, были сделаны определенные открытия и на данный момент выделяют 6 механизмов проникновения вирусов 5. К ним относят макропиноцитоз, три вида эндоцитоза клатринзависимый, клатриннезависимый и холсстеролзависимый, а также с помощью образования кавеол и, подобный последнему, механизм, зависимый от динамина. К заключительному, четвертому, этапу входа относится освобождение генома вируса от нуклеокапсидной оболочки и начало транскрипции его РЫК. Принято, что одетые вирусы проникают путем слияния их оболочки с мембраной клетки, а неодетые путем формирования поры или локального лизиса мембраны 7. Для рецепторопосредованного эндоцитоза, характерно наличие окаймленных вакуолей, в формировании которых принимает участие белки клеткнхозяина 6. Необходимо отметить, что при эндоцитозе, по причине ограничения вирусной частицы мембраной вакуоли, возникает проблема доставки его генома к местам последующей репликации в цитоплазме и ядре инфицированной клетки.