Урокиназа и плазмин в регуляции адгезии моноцитов

• Автор: Арефьева, Татьяна Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.25, 14.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 109 с.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Атеросклероз и рестеноз это воспаление

Моноциты в патогенезе атеросклероза

Моноциты в патогенезе рестеноза

Взаимодействие моноцитов с компонентами сосудистой стенки

Этапы миграции лейкоцитов в стенку сосуда

Факторы, способствующие адгезии и ми фации моноцитов в атеросклеротической бляшке

Молекулы адгезии моноцитов и их участие в миграции клеток в стенку сосуда

Двидность лейкоцитарных интегринов соотношение количества и качества

Интегрины Мас1 и УЬА4 в регуляции эффекторных фу нкций моноцитов

Система активации плазминогена в адгезии и миграции моноцитов
Экспрессия компонентов фибринолитической системы моноцитамимакрофаг а ми
Система рецептор урокиназы урокиназа в адгезии и миграции моноцитов
Заключение
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Характеристика пациентов и контрольной группы доноров
Получение периферической крови
Активация моноцитов в цельной крови
Выделение мононуклеарных клеток и получение фракции, обогащенной моноцитами
Культивирование линейных клеток
Оценка количества антигенов на поверхности лейкоцитов
Оценка связывания урокиназы с моноцитами
Анализ содержания урокиназы в плазме крови
Приготовление матрикса из фиброиектина
Приготовление матрикса из фибриногена и продуктов его расщепления плазмином
Оценка клеточной адгезии
Определенно прокоагуляционной активности моноцитов, опосредованной тканевым фактором
Статистический анализ
Формы рекомбинантной урокиназы и антитела
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Динамика экспозиции моноцитарных антигенов при активации клеток в цельной крови
Характеристика больных стабильной стенокардией и контрольной группы доноров
Клинические и ангиографичсскис характеристики больных, перенесших коронарную ангиопластику
Урокинаэа в плазме кропи больных стабильной стенокардией и здоровых доноров
Рецепторы урокиназы и урокиназа на моноцитах больных стабильной стенокардией и здоровых доноров
Рецензоры урокиназы и мембраносвязанная урокиназа на моноцитах при коронарном рестснозс
Экспрессия интегринов Мас1 моноцитами больных стабильной стенокардией и здоровых доноров
Моноцитарные интегрины Мас1 и ТА4 при коронарном рестенозе
Урокиназа не влияет на ирокоатуляционную активность моноцитов, опосредованную тканевым фактором
Урокиназа стимулирует адгезию промоноцитарных клеток и7 на фибриногене, но не на фибронектнне
Стимулирующее действие урокиназы на фмбриногензависимую адгезию клеток Е7 связано с образованием плазмина
Адгезия моноцнтарных клеток зависит от расщепления фибриногенового матрикса плазмином
Молекулы Мас1 и 1САМ1 в адгезии моиоцитариых клеток на фибриногене и продуктах его плазминового протеолиза
Зависимость адгезии моноцнтарных клеток от степени деградации фибриногена
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Необходимым условием мнтегринзависимой адгезии клеток является увеличение авидности интегринов, сопровождающееся экспозицией дополнительных молекул на поверхности клетки и повышением аффинности связывания индивидуальных молекул с соответствующими лигандами. Система урокиназного пути активации плазмииогена тесно связана с адгезией и миграцией моноцитов. Локализация урокиназы и плазмииогена на поверхности моноцитов с помощью соответствующих рецепторов и сайтов связывания обеспечивает околоклеточный протеолиз, необходимый для инвазии. Способность рецептора урокиназы связываться с витронектином и его участие в регуляции авидности интегрннов, в частности лейкоцитарных Згинтегринов МасI, определяют его функцию как координатора адгезии клеток. Помимо тгого. К началу данного исследования в литературе отсутствовали данные об экспрессии урокиназы, рецепторов урокиназы, интегрннов Мас1 и V4 моноцитами больных с коронарным атеросклерозом и рестенозом. Не было определено участие урокиназы в Мас1зависимой адгезии моноцитов, а также в стимуляции эффскторных функций моноцитов, в частности, в индукции прокоагуляционной активности, опосредованной тканевым фактором. Целью работы было исследование роли урокиназы в регуляции адгезии и прокоагуляционной активности моноцитов. Исследовать содержание урокиназы в плазме и количество урокиназы. Определить экспрессию рецепторов урокиназы, интегрннов Мас1 и V4 моноцитами крови больных с коронарным атеросклерозом и рестенозом и здоровых доноров. Изучить влияние урокиназы и плазмина на прокоагуляционную активность моноцитов, опосредованную тканевым фактором. Исследовать влияние урокиназы на адгезию моноцитов на фибронектине и фибриногене. Научная новизна. Получены данные о повышенном содержании урокиназы в плазме и на моноцитах крови при коронарном атеросклерозе. Изучена зависимость адгезии моноцитарных клеток на фибриногене от присутствия в среде урокиназы и плазмина. Определены молекулы, принимающие участие в адгезии моноцитов на фибриногене и продуктах его плазминового иротеолиза. Показано, что урокиназа и плаз. Получены данные об увеличении мембранной экспозиции ингеринов Мас1 и ХА4 активированными моноцитами крови больных с рестенозом после коронарной ангиопластики но сравнению с пациентами без рестеноза. Практическая значимость. Данные настоящего исследования способствуют выяснению молекулярных механизмов адгезии и миграции моноцитов в очагах острого и хронического повреждения сосудистой стенки. Полученные результаты позволяют определить новые мишени для поиска маркеров и предикторов рестеноза после коронарной ангиопластики. Этиология и патогенез коронарного атеросклероза предмет постоянных дискуссий и споров. Тем не менее, ряд клинических и экспериментальных данных позволяет рассматривать атеросклероз как хроническое воспалительное заболевание. Показано, что воспаление играет существенную роль на всех этапах морфогенеза атеросклеротической бляшки, на стадиях ее инициации и прогрессирования, а обострение воспалительной реакции приводит к эрозии или изъязвлению бляшки , , i, i, . С помощью пагоморфологическнх и иммуногистохимических методов было выявлено накопление клеток воспаления, преимущественно моноцитовмакрофагов, в бляшках различных типов , , . Активация этих клегок и их взаимодействие друг с другом приводит к локальной продукции, главным образом, макрофагами, факторов, оказывающих мнтогениое и хемотаксическое действие на клетки сосудистой стенки, обладающих прокоагуляционной активностью, и ряда протсолнтических ферментов, способствующих дестабилизации бляшки. Воспалительная реакция при атеросклерозе ограничивается не только участком поврежденной стенки сосуда. Она также имеет системные проявления, характеризующиеся увеличением концентрации в плазме крови белков острой фазы, растворимых молекул адгезии, цитокипов, а также появлением в кровотоке активированных лейкоцитов. Если участие воспалительных клеток в атерогеиезе является хорошо документированным, то их роль в рестенозе локальном сужении просвета сосуда после ангиопластики остается спорной. Тем не менее, многие авторы рассматривают рсстеноз как следствие воспалительной реакции, возникающей в ответ на повреждение артериальной стенки.