Экспрессные иммунохимические методы определения загрязнителей в продуктах питания

• Автор: Нестеренко, Ирина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 150 с. : ил.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Загрязнители пищевых продуктов.

1.1.1 Сульфаниламидные препараты

1.1.2. Микотоксины.

1.2. Методы определения сульфаниламидных препаратов и микотоксинов.

1.2.1. Нсимммупохимичсские методы определения сульфаниламидов

1.2.2. Иммунохимическис методы ИХМ определения сульфаниламидных препаратов

1.2.1.1. Специфическое определение сульфаниламидов методом иммуноанализа.

1.2.1.2. Определение сульфаниламидов методом классспецифического иммуноанализа.

1.2.1.3. Перспективные направления развития иммуннохимических методов

определения сульфаниламидов

Экспрессные иммунохроматографические методы определения сульфаниламидов с
помощью тестполосок.
Метод с молекулярными отпечатками полимеров МИГ.
Новые подходы к флуороиимуно анализу.
1.2.2.0собсшости определения сульфаниламидов в реальных образцах
1.3. Методы определения микогоксинов.
1.3.1. Ненммунохнмнческне методы определения микотоксинов
1.3.2. Иммунохимические методы определения микотоксинов
Твердофазный иммуноферментный анализ.
Гомогенные иммунохимические методы определения микотоксинов
Виосенсоры.
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
2.1. Материалы и оборудование
2.2. Методы исследования.
2.2.1.Синтез этилсндиамннфлуореецсннтнокарбомата ЭДФ.
2.2.2. Синтез глугаровых производных сульфамстазина, сульфахлорниридазина и сульфаметоксишрндазиил
2.2.3. Синтез амннобезолсульфаниламндаминобутановой кислоты СЛБ, аминобензолсульфаламидаминобснзойной кислоты САБ1 и амшобснзолсульфаламдамшогсксановой кислотыСАГ
2.2.4. Синтезы 5,7динитробензофуразановых производных сульфаниламидных препаратов и 4 4амиобсзолсульфаиламидаминобутановой кислоты
2.2.5. Синтез глутаровых производных сульфаниламидных препаратов, меченных ЭДФ
2.2.6. Синтезы САБ ,САБ1, САГ и БФЗСАБ, меченных ЭДФ
2.2.7. Синтез фталевых производных сульфамегазина, сульфадиазина, сульфаметизола, сульфатназола, сульфаметоксазола, сульфадиметоксина, сульфамеоксиниридазина, меченых ЭДФ.
2.2.8.Синтезы сульфаниламидов, меченных флуоресцеинизотиоцнонатом
2.2.9.Синтсз конъюгатов производных сульфаниламидных препаратов с белками .
2.2.9.1.Синтез конъюгатов овальбумина и соевого ингибитора трипсина с глутаровыми производными сульфаниламидов.
2.2.9.2. Синтез конъюгатов фталевых производных сульфаметазина, сульфадиазина, сулг.фаметизола, сульфатиазола, сульфаметоксазола, сульфадиметоксина, сульфамстоксипиридазина с белкаминосителями.
2.2.9.3. Синтез конъюгатов САБ с белками .
2.2.9.4. Синтез конъюгатов БФЗСАБ с белками.
2.2 Получение конъюгата антител против сульфаниламидов с коллоидным золотом
2.2 Получение иммунодетектирующего слоя
2.2 Методика проведения поляризационного флуоресцентного иммуноанализа .
2 Тестирование антисывороток методом поляризации флуоресценции
2 Построение градуировочного графика.
2 Измерение кинетики ассоциации и диссоциации комплекса антигенантитело методом поляризации флуоресценции
2 Определение аналитических характеристик иммуноанализа
Предел обнаружения
Воспроизводимость
Специфичность анализа
Тест на открытие.
2.2 Методика приготовления проб меда.
2.2 Методика приготовления проб молока.
2.2 Методика приготовления проб специй.
2.2 Получение антител
2.2 Методика проведении иммунохроматографического определения
сульфаниламидов методом тестполосок.
2.2 Методика проведения иммунохроматографического определения
охратоксина А
3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СУЛЬФАНИЛАМИДОВ МЕТОДОМ ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО ИММУНОАНАЛИЗА.
3.1. Получение сульфаниламидных препаратов, меченных флуоресцентной меткой
3.2. Разработка методики специфического определения сульфахиноксалииа, сульфа гназола, сульфаниридина, сульфамстазина и сульфадиметоксини.
3.2. Разработка методики специфического определения сульфахлорпиридазина и сульфамстоксипиридазина
4. ГРУППСПЕЦИФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ.
4.1. Подходы к груннснецифическому определению сульфаниламидов иммунохимичсскими методами.
4.2. Синтез производных сульфаниламидных препаратов, меченных флуоресцентной меткой.
. Подбор нммунорсагсптов и оптимизация условий группспецифического определения сульфаниламидных препаратов
4.3.1. Тестирование антисывороток, полученных против САБ1 и САГ
4.3.2. Проведение группспецнфического определения сульфаниламидных препаратов с использованием антисывороток аитиСАБ1ОВА, антиСАБ1ТГ, антиСАГБСА и антиСАГОВА
4.3. Иммунохроматографическое группспецифическое определение
сульфаниламидов с использованием тест полосок.
4.3.1. Синтез конъюгата СЛБ с бычим сывороточным альбумином
4.3.2. Получение конъюгата антител против сульфаниламидов с коллоидным золотом
4.3.3. Определение сульфаниламидов с помощью стриптсста.
4.4. Тестирование антисывороток антиБФЗСАБ.
4.5. Тестирование антител против САФБСА.
5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУЛЬФАНИЛАМИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ.
5.1. Определение сульфаниламидных препаратов в меде.
5.2. Определение сульфаниламидных препаратов в молоке.
6. НЕИНСТРУМЕНТАЛЬНЫЕ ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ.
6.1. Иммунохимнчсскис тестметоды определения микотоксинов
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ


В результате образуется ложная фолиевая кислота, которая не способна выполнять функции истинной кислоты рис. З 2. Таким образом, эти соединения блокируют биосинтетический путь образования фолиевой кислоты, ингибируя дигидрофолатсинтетазу 5. В средах, содержащих большое количество ПАБ, таких как гной или продукты распада тканей, антимикробное действие сульфаниламидов значительно ослабляется. Некоторые препараты сульфаниламидов для местного применения содержат серебро сульфадиазин серебра, сульфатиазол серебра. В результате диссоциации ионы серебра медленно высвобождаются, оказывая бактерицидное действие за счет связывания с ДНК, которое не зависит от концентрации ПАБ в месте применения. Поэтому эффект данных препаратов сохраняется в присутствии гноя и некротизированной ткани . Все сульфамидные препараты по фармоки нети чески м свойствам можно разделить на четыре группы препараты короткого действия сульфаметазин и др. Изначально сульфаниламиды имели широкий спектр антимикробной активности, включая , неэтерококковые виды , i, i, ii i, эитерические 1рамотрицатсльные виды ii i и iii и некоторые виды анаэробных бактерий 2. Рис. Однако, следует заметить, что в медицине роль сульфаниламидов в последнее время несколько снизилась по причине распространения устойчивых к ним штаммов, развития нежелательных побочных эффектов и появления мощных антибиотиков. В то же время сульфаниламидные препараты, такие как сульфаметоксазол котримоксазол, бисептол, септрим, сульфатиазол норсульфазол, сульфаметазин сульфадимезин, этазол, фталазол продолжают использоваться для лечения некоторых инфекций у человека и животных. В зависимости от дозы и периода действия на организм, сульфаниламиды могут вызывать аллергические реакции, диспепсические явления, изменения формулы крови. Иногда наблюдается нарушение функции ЦНС. При лечении доза препарата не должна превышать границы, указанные в фармацевтическом справочнике. В связи с этим необходим строгий контроль содержания препарата в крови и времени вывода его из организма, особенно при нарушении функции почек 6. В настоящее время сульфаниламиды все чаще используют в ветеринарии для профилактики и лечения некоторых бактериальных и протозойных инфекций у животных, а также в качестве генераторов роста. Требуется определенный период не менее дней после прекращения применения сульфаниламидов перед забоем животных. Но тем не менее иногда можно обнаружить в мясомолочной продукции эти соединения в значительных количествах, способных вызвать у людей, употребляющих в пищу данные продукты, токсические или аллергические реакции. В г. Европейским Союзом была установлена предельно допустимая концентрация ПДК сульфаниламидов в продуктах питания 0 нгмл для жидких образцов и 0 нгг для твердых объектов в Японии ПДК сульфаниламидов составляет нгг 7. Присутствие остаточных количеств сульфаниламидов в мясомолочной продукции и меде, которое необходимо строго контролировать, потому что оно нередко превышает ПДК для этих веществ, вероятно, связано с недостаточно быстрым выведением их из организма животных или несоблюдением условий их лечения 8. Употребление человеком в пищу продуктов, содержащих остаточные количества сульфаниламидов, нежелательно, так как оно может вызывать появление устойчивых к данным антибактериальным средствам патогенных микроорганизмов. Кроме того, известно, что генетически измененные структурные фрагменты патогенных микроорганизмов могут передаваться i vi непатогенным штаммам, что оказывает влияние на здоровье человека 9. Таким образом, необходимы точные, простые, экономичные по стоимости и времени методы определения остаточных количеств сульфаниламидов, пригодные для проведения рутинных анализов, которые позволяют контролировать их содержание в пищевых продуктах на уровне ПДК. В настоящее время, по данным разных авторов, примерно от до зерновых, производимых во всем мире, заражены микотоксинами от греч. К этому классу соединений относятся токсины, низкомолекулярные вторичные метаболиты, которые продуцируются микроскопическими плесневыми грибами.