Разработка набора реагентов для оценки эффективности поствакцинального иммунитета к вирусу бешенства в серологических реакциях

• Автор: Акиньшина, Татьяна Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Морфология вируса бешенства

2.2. Химический состав вируса бешенства

2.3. Очистка и концентрирование вируса бешенства

2.4. Диагностика бешенства

2.5. Выделение антивидовых иммуноглобулинов и получение конъюгатов с пероксидазой хрена для

иммунофсриментного анализа

2.5.1 Выделение имуноглобулинов

2.6. Антиидиотипические антиИД антитела

2.7. Заключение
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы
3.2. Результаты исследований
3.2.1. Очистка и концентрирование вируса бешенства
3.2.2.Биологические и физикохимических свойства очищенного и концентрированного культурного вируса бешенства
3.2.3. Выделение гликопротеина и нуклеопротеида вируса бешенства
3.2.4. Диагностикумы на основе очищенных и концентрированных препаратов культурального вируса бешенства
3.2.4.1. Серологические методы диагностики бешенства
3.2.4.2. Иммуноферментный анализ для определения уровня антирабических антител.
3.2.4.2.1. Выделение иммуноглобулина класса в из
сыворотки крови крупного рогатого скота
3.2.4.2.2. Получение антиСКРС из гипериммунной сыворотки и выделение из нее антивидовых
иммуноглобулинов .
3.2.4.2.3. Меченые антивидовых иммуноглобулинов анти
I ферментом пероксодазой
3.2.5.Гуморальный иммунитет при вакцинации
культуральной антирабической вакциной
3.2.6. Поликлональные антиидиотипические антитела к
вирусу бешенства.
3.2.7. Тестсистема для индикации вируса бешенства и антирабических антител методом ИФА
3.2.7.1.Конъюгат с пероксидазой хрена ПО в титровании методом ИФА антирабических антител
3.2.7.2.Протеин в титровании
методом ИФА антирабических антител
4. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕШЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Подтверждено, что гемагглютинин вызывает интенсивное образование вируснейтрализующих антител в крови иммунизированных животных и является компонентом, ответственным за иммуногенную активность вириона и может быть применен в качестве антигена при определении уровня вируснейтрализующих антител. Показана возможность повышения чувствительности серологических реакцийРДСК при применении концентрированного вируса ПЭГ М, и РИГА, концентрированного на геле фосфата алюминия и ультрацентрифугированием. Установлена корреляция между показаниями активности сывороток при постановке ИФА с добавлением коныогата с пероксидазой и с протеином А. Изучен гуморальный иммунитет на уровне образования антирабических антител, относящихся к классам 1М и 1С и его подклассам. Получены антиидиотипические антитела, содержащие внутренний образ антигена бешенства и способные индуцировать иммунный ответ у животных в отсутствии вирусного антигена. Практическая значимость. На основании модифицированных ранее разработанных во ВНИТИБП методов очистки и концентрирования вируса бешенства, штамм Щелково, репродуцированного в культуре клеток ВНК, созданы антигены для определения в серологических реакциях уровня антирабических антител в сыворотках животных в реакции связывания комплемента, непрямой гемагглютинации, а также применяемые в качестве компонентов для иммуноферментного анализа и показавшие высокую эффективность в реакциях. Методической комиссией ВНИТИБП утверждены 4 методики по получению антигенов для серологических реакций. Разработаны компоненты и создан набор для иммуноферментного анализа репродукции антирабических антител в сыворотке крови животных. НТД на набор утверждается в общепринятом порядке. Бешенство остро протекающая инфекционная болезнь теплокровных животных, характеризующая поражением центральной нервной системы. Бешенство зарегистрировано в большинстве стран мира. Помимо собак, кошек, диких животных, бешенство передают кровососущие летучие мыши вампиры. Из диких животных бешенством часто заражаются лисы, барсуки, скунсы, шакалы, койоты, еноты, хорьки, куницы, летучие мыши и дикие кошки. Поэтому взаимосвязи вируса бешенства представляет собой сложное явление, связанное с экологией диких животных. По классификации Международного Комитета по таксономии вирусов МКГВ с года вирус бешенства относится к семейству vi, роду vi. Криптограмма вируса I42V0. Расшифровывается криптограмма следующим образом однонитчатый РНКсодержащий вирус I, молекулярный вес 4млн. , для разных представителей семейств хозяевами являются позвоночные V, пути передачи контактный 0 . Бешенство представляет собой важную проблему современной инфекционной патологии животных, проблему экологическую, эпизоотологическую, эпидемиологическую и экономическую. Проблема эта существенно обострилась в последние десятилетия в связи с широким распространением болезни в большинстве стран мира почти всех континентов, увеличением видов животных, участвующих в эпизоотологическом процессе, ростом числа случаев болезни среди людей. Впервые морфологию вируса бешенства при помощи электронной микроскопии негативно окрашенных неочищенных препаратов, полученных из инфицированных клеток почки хомяка, изучал в г. i . Кроме того, в том же году КбштюЮ 8. Вирус бешенства имеет форму пули с одним округлым и другим плоским концом ,3,1,1. На плоском конце, не прикрытым наружной оболочкой, как правило, имеется выемка. Общая схема строения рабдовирусов представлена на рис. Длина и диаметр вирусной частицы имеют размеры 00x нм 4. Какойлибо регулярной структуры на его поверхности обнаружить чаще всего не удается. Однако Ниште1ег К. Полная вирусная частица на продольном срезе, как и все рабдовирусы, похожа на пулю, имеющую две мембраны различной плотности. Более плотная наружная мембрана не закрывает плоский конец, что хорошо заметно на продольном срезе. На плоском конце вириона имеется осевая полость, которая может иметь глубину до 12 общей длины вириона. По данным ряда исследователей плотность вириона 1,1,гсм3, константа седиментации 0 Б, молекулярная масса ММ 5х6 дальтон Д ,6,7. Рис.